[发明专利]表达、分泌及运输功能性microRNA/siRNA的方法及其应用

说明书

本发明涉及含功能性microRNA/siRNA的细胞微粒子及其应用。具体地，本发明公开了一种功能性microRNA和/或siRNA的用途，用于制备施用于哺乳动物的组合物，施用所述组合物后在动物体内的第一部位中形成细胞微粒子，并运送到第二部位，从而改善第二部位的生理状态或治疗第二部位的疾病，其中第二部位不同于第一部位。所述用途有利于优化功能性microRNA和/或siRNA的给药方式。

发明领域

本发明属于医药领域，具体地涉及功能性microRNA/siRNA的新应用，更具体地涉及含功能性microRNA/SiRNA的细胞微粒子及其应用。

背景技术

微小核糖核酸microRNAs(microRNA)是一类长约19-23个核苷酸的单链小核糖核酸分子，位于基因组非编码区，进化上高度保守，可以通过抑制靶基因的翻译过程对基因表达进行调节，并与动物的许多正常生理活动，如生物个体发育、组织分化、细胞凋亡以及能量代谢等密切相关，同时也与许多疾病的发生及发展存在着紧密的联系。自参与调控线虫时序发育的lin-4与let-7被发现以来，microRNA已逐渐成为调控mRNA稳定性和蛋白翻译的研究热点，分别在2002年和2003年两度入选Science杂志年度十大科技突破。现在预测microRNA至少能调控5300个人类基因，也就是所有基因的30％。随着研究的深入，越来越多的microRNA被发现，其中microRNA与肿瘤的关系越来越成为研究的重点，已经发现若干microRNA通过负调控基因的表达与慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌高度相关。

干扰核糖体酸(small interfering RNA，siRNA)是一类由20多个核苷酸组成的双链RNA分子，可以通过特异性降解靶基因的信使核糖核酸(messenger RNA，mRNA)起到沉默基因表达的作用。这一过程被称为RNA干扰(RNA interference，RNAi)。

RNA干扰是基因转录后调控的一种方式。siRNA可以对其靶基因进行特异性识别，并能招募被称为沉默复合体(RNA induced silencing complex，RISC)的蛋白质复合体。RISC包含核糖核酸酶等，可以通过靶向切割同源性mRNA的方式，特异、高效地抑制基因的表达。由于使用RNA干扰技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于生物医学实验研究及各种疾病的治疗领域。

MicroRNA及siRNA参与疾病治疗

目前研究已经证明可以通过调节生物体内特定微小核糖核酸的含量或通过注入外源性siRNA，阻断或延缓疾病的进程。两者都可以通过影响特定蛋白质的表达参加疾病的治疗和预防。比如miR-206在骨骼肌中的表达可改善运动神经元的损伤或丧失，其作用主要是通过促进与激活肌肉与肌肉的神经元之间联系的再生来实现的，从而可以治疗肌萎缩性侧索硬化(或称ALS)；通过下调肝脏中的miR-122表达，能够对丙型肝炎起到治疗作用；miR-15和miR-16的丢失和之后导致的Bcl-2过表达是人类慢性淋巴性白血病(CLL)发生的重要的机理，在生物体过表达miR-15和miR-16可以起到治疗CLL的作用。

尽管MicroRNA及siRNA的研究开发取得了不少成果，但将其作为药物真正用于医疗还面临很多问题，尤其是如何提高此类药物的传送效率，通常需要在病灶部位给药才能有效地发挥其药效，而这种原位给药的治疗方法严重限制了药物的应用。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种制备施用于哺乳动物的组合物的功能性microRNA和/或siRNA的用途，所述组合物在动物体内的第一部位中形成细胞微粒子，并运送到第二部位，从而改善第二部位的生理状态或治疗第二部位的疾病，其中第二部位不同于第一部位。