[发明专利]用于分析物定量的中子编码质量标签

权利要求书

1.一种用于确定多个样品中分析物的丰度的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供包括至少第一细胞培养物和第二细胞培养物的多个细胞培养物；

(b)向每种所述细胞培养物提供不同的同位素标记的氨基酸，其中各同位素标记的氨基酸包含至少两个稳定的重同位素，其在正常氨基酸中被替换为轻同位素，并且其中所述两个重同位素中至少一个选自¹⁵N、¹⁸O和³⁴S，其中每种所述细胞培养物的所述同位素标记的氨基酸是相同氨基酸的同位素体；

(c)培养每种所述细胞培养物的细胞，从而将不同的同位素标记物引入每种细胞培养物产生的蛋白质中；

(d)生成每种所述细胞培养物的样品，其中每种样品的特征在于不同的同位素标记的分析物，所述样品至少包括具有第一同位素标记的分析物的所述第一细胞培养物的第一样品和具有第二同位素标记的分析物的所述第二细胞培养物的第二样品，其中每种样品的所述同位素标记的分析物是同位素体；且其中所述第一同位素标记的分析物和所述第二同位素标记的分析物的分子质量差异小于或等于300mDa；

(e)利用提供分辨率等于或大于100000的质谱分析技术分析每种样品的所述同位素标记的分析物，从而产生每种样品的所述同位素标记的分析物的独立且可区分的质谱信号；以及

(f)比较每种样品的所述同位素标记的分析物的所述质谱信号，从而确定所述多个样品中所述分析物的丰度。

2.一种用于确定多个样品中分析物的丰度的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供每种均含有所述分析物的所述多个样品，其至少包括第一样品和第二样品；

(b)向每种样品提供不同的同位素标记试剂，其中各同位素标记试剂包含至少两个稳定的重同位素，其在对应的未标记试剂中被替换为轻同位素，并且其中所述两个重同位素中至少一个选自¹⁵N、¹⁸O和³⁴S，其中每种所述样品的所述同位素标记试剂是同位素体，并且其中所述同位素标记试剂不是具有报告基团和质量平衡基团的等量异位标签；

(c)使所述分析物和每种样品的同位素标记试剂发生化学反应，从而生成每种样品的不同的同位素标记的分析物，包括所述第一样品的第一同位素标记的分析物和所述第二样品的第二同位素标记的分析物；其中每种样品的所述同位素标记的分析物是同位素体；并且其中所述第一同位素标记的分析物和所述第二同位素标记的分析物的分子质量差异小于或等于300mDa；

(d)利用提供分辨率等于或大于100000的质谱分析技术分析每种样品的所述同位素标记的分析物，从而产生每种样品的同位素标记的分析物的独立且可区分的质谱信号；以及

(e)比较每种样品的同位素标记的分析物的所述质谱信号，从而确定所述多个样品中所述分析物的丰度。

3.权利要求1或2的方法，其中所述样品的同位素标记的分析物不包括具有报告基团和质量平衡基团的等量异位质量标签。

4.权利要求1或2的方法，其中使用单级质谱技术进行所述分析每种样品的所述同位素标记的分析物的步骤。

5.权利要求1或2的方法，其中所述使用所述质谱分析技术分析每种样品的所述同位素标记的分析物的步骤包括：

从每种样品的每种所述同位素标记的分析物生成离子；

将所述离子碎片化，以生成每种样品的具有不同同位素标记物的产物离子；以及

检测每种样品的所述产物离子。

6.权利要求5的方法，其中所述产物离子是具有所述同位素标记的肽碎片离子。

7.权利要求5的方法，其中检测所述产物离子而不进行对所述产物离子的进一步质量选择或碎片化。

8.权利要求1或2的方法，其中所述分析每种样品的所述同位素标记的分析物的步骤不是使用MS^x多级质谱法进行的，其中x大于或等于2。