[发明专利]一种利用高速逆流色谱法从贝母中分离纯化贝母辛的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学技术领域，涉及一种从中药贝母中制备贝母辛的方法，特别涉及一种利用高速逆流色谱法（HSCCC）从贝母中分离纯化贝母辛的方法。

背景技术

从百合科贝母属、藜芦属等植物中发现的介黎芦类异甾体生物碱环巴胺（cyclopamine）是当前国际上最受关注的抗肿瘤天然产物之一，研究表明它是一种Hedgehog通路抑制剂，对多种癌症如非小细胞肺癌、胃癌、胰腺癌等有良好的体内外抑制作用。由于环巴胺在植物中含量较低，同时化学全合成非常困难，从植物中分离环巴胺类似物、再通过半合成得到环巴胺是较可行的策略。目前已有人成功将贝母辛（peimisine）转化成环巴胺。因此，贝母辛是一种极具开发利用价值的化合物。

贝母为止咳化痰常用中药，来源于百合科（Liliaceae）贝母属（Fritillaria）多种贝母的鳞茎。2010年版《中国药典》收载有五大类贝母：川贝母、浙贝母、平贝母、伊贝母和湖北贝母。各类贝母均含有一定量的介黎芦类异甾体生物碱，其中代表性的化合物为贝母辛，几乎在所有的贝母品种中都有分布。目前，从贝母中分离纯化贝母辛，现有的方法主要有柱色谱法，但其分离周期长，操作繁琐，有机试剂消耗量大且回收效率低。

高速逆流色谱是一种基于样品在互不混溶的两相溶剂之间分配作用的分离技术，该技术不采用固态吸附剂，是一种液-液分配色谱技术，即利用互不相溶的两相溶剂体系中的一相作为色谱分离的固定相，另一相作为流动相。高速逆流色谱没有固态载体的使用，因此与传统的柱色谱技术相比，不存在样品的不可逆吸附以及对样品的污染等影响。与传统的柱色谱相比它还具有制备量大、分离过程短、样品预处理简单、节省溶剂、经济有效、溶剂体系选择范围大等一系列优点。目前高速逆流色谱技术已经广泛的应用于医药化工等领域，尤其是在天然产物的分离与纯化过程中已经被视为是一种新型有效的分离技术。而合适的溶剂系统（流动相、固定相）、转速、流速、进样量等参数的优化在高速逆流色谱制备中起着关键性的作用，特别是样品中各组分的分配系数K值决定着溶剂系统合适与否，因此K值的测定是选择溶剂系统的重要环节。

发明内容

发明目的： 针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种利用高速逆流色谱法从贝母中分离纯化贝母辛的方法，具备制备时间短，操作简单，样品损失少等优点，并且可以获得纯度较高的贝母辛单体。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种利用高速逆流色谱法从贝母中分离纯化贝母辛的方法，包括以下步骤：

1）取干燥贝母鳞茎，粉碎成粗粉，加氨水碱化，用酒精热回流提取，合并提取液，减压浓缩得到浸膏；将浸膏用0.1M盐酸溶解，过滤得酸液，将酸液先用石油醚萃取脱脂，取酸水层用10%氢氧化钠调pH至9~10，再用二氯甲烷萃取数次，合并二氯甲烷液，减压浓缩干燥得贝母总生物碱；

2）采用高速逆流色谱分离纯化贝母辛；将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为2~4:5:2~3:5配成混合溶液置于分液漏斗中静置12h；取上层作为固定相，下层作为流动相；先泵入固定相，待固定相充满高速逆流色谱仪柱子，停止泵入固定相，再泵入流动相，当有流动相流出且基线平衡后，取贝母总生物碱粉末溶于等量的流动相和固定相，由进样阀进样，观察色谱图，待目标峰出现时收集馏分，挥干溶剂，得贝母辛。

步骤1）中，所述的提取方法中酒精的浓度为70%～95%。

步骤2）中，高速逆流色谱操作为：设定的恒温循环器温度为35℃，设置的波长为214nm；泵入固定相的流速为5~20mL/min，主机转速为800~850rpm，泵流动相的流速为1.5~2mL/min。

有益效果：与现有技术相比，本发明的利用高速逆流色谱法从贝母中分离纯化贝母辛的方法，利用高速逆流色谱分离技术，制备时间短，操作简单，样品损失少，并且可以获得纯度较高的贝母辛单体。具有很好的实用性。

附图说明

图1 是实施例1所得的高速逆流色谱图；

图2 是实施例1所得的贝母总生物碱高效液相色谱图；

图3 是贝母辛标准品的高效液相色谱图；

图4 是实施例1所得的贝母辛高效液相色谱图；

图5 是实施例1所得的贝母辛二级质谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1

一种利用高速逆流色谱法从贝母中分离纯化贝母辛的方法，包括以下步骤：