[发明专利]质谱法鉴别肉制品中动物源性成份

权利要求书

1.一种检测肉制品中动物源性的引物系统，其特征在于该引物系统包括一对扩增引物和6条延伸引物，其中，扩增引物对序列选自SEQ ID No：1-2，延伸引物序列分别选自SEQ ID No：3-8，并且所述延伸引物分别对应于羊、牛、猪、鸡、鸭、兔。 

2.权利要求1的引物系统，其中扩增引物序列为核心序列，其在5'端可包括保护5-15个碱基序列，优选为10bp的tag：ACGTTGGATG。 

3.权利要求1的引物系统，其中延伸引物5'端可增加作为接头的碱基序列，其中优选为1-15个碱基，更优选1-3个碱基。 

4.由权利要求1至3的引物系统所制备的用于鉴定肉制品中动物源性成分的检测产品，其中所述动物源性成分为羊、牛、猪、鸡、鸭、兔。 

5.权利要求4的检测产品，其中产品为检测试剂盒，包括： 

（1）用于PCR的反应试剂，包括：上述扩增引物对，耐高温的DNA聚合酶，dNTPs，PCR反应缓冲液； 

（2）用于PCR产物纯化的试剂； 

（3）用于单碱基延伸反应的试剂，包括：延伸引物，耐高温的单碱基延伸酶，ddNTPs，延伸反应缓冲液。 

6.权利要求5的检测产品，其中试剂盒还可包括：阴性质控品，阳性质控品，纯化用树脂，点样及质谱检测用靶片，外切酶，基因组DNA提取试剂等试剂；和/或 

用于PCR产物纯化的试剂选自碱性磷酸酶，或碱性磷酸酶和外切酶ExoI，或电泳凝胶回收试剂，或PCR产物纯化柱。 

7.使用权利要求1-3的引物系统，或权利要求4-6的产品来检测肉制品中动物源性成分的方法，包括： 

（1）PCR扩增：使用通用PCR引物进行扩增，得到PCR产物； 

（2）PCR产物纯化：对步骤（1）得到的PCR产物进行纯化，以减少对后续反应的干扰； 

（3）单碱基延伸：使用6条特异性的延伸引物，在一个反应体系中，对步骤（2）得到的纯化后PCR产物进行多重单碱基延伸，延伸引物延伸一个核苷酸； 

（4）延伸产物纯化：对步骤（3）得到的延伸产物进行纯化，以获得高纯的延伸产物，避免盐离子等杂质对后续检测的影响； 

（5）质谱仪检测：将步骤（4）得到的纯化产物点在含有基质的靶片上，放入质谱仪进 行检测。

8.权利要求7的方法，其中步骤2的纯化过程可以选自碱性磷酸酶消化、碱性磷酸酶和外切酶ExoI消化、切胶纯化、PCR纯化柱过柱等。 

9.权利要求1-3的引物系统，或权利要求4-6的产品，在鉴定肉制品中动物源性成分的用途。 

10.权利要求9的用途，其中所述动物源性成分为羊、牛、猪、鸡、鸭、兔。