[发明专利]一种阿魏酸脱羧酶晶体结构及其解析方法

权利要求书

1.一种阿魏酸脱羧酶的晶体结构，其特征在于，所述阿魏酸脱羧酶晶体结构由8个不对称单体组成，分别为：单体A（1）、单体B（2）、单体C（3）、单体D（4）、单体E（5）、单体F（6）、单体G（7）和单体H（8）；含有一个3-羟基肉桂酸配体；

晶体结构参数为：

空间群C121；

晶胞参数

2.权利要求1所述晶体结构，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述阿魏酸脱羧酶晶体结构由8个不对称单体组成，分别为：单体A（1）、单体B（2）、单体C（3）、单体D（4）、单体E（5）、单体F（6）、单体G（7）和单体H（8）；含有一个3-羟基肉桂酸配体；

晶体结构参数为：

空间群C121；

晶胞参数

3.权利要求2所述晶体结构，其特征在于，所述阿魏酸脱羧酶分子量为112KDa。

4.权利要求2所述晶体结构，其特征在于，所述阿魏酸脱羧酶晶体结构中单体A（1）和单体H（8）组成二聚体、单体B（2）与单体F（6）组成二聚体、单体C（3）和单体E（5）组成二聚体、单体D（4）与其不对称伴侣组成二聚体、单体G（7）与其不对称伴侣组成二聚体。

5.权利要求2所述晶体结构，其特征在于，所述阿魏酸脱羧酶晶体结构中，单体B（2）和单体F（6）组成的二聚体是通过两个α-螺旋中的氨基酸残基的相互作用来维持，通过盐桥和疏水相互作用调节结构。

6.权利要求2所述晶体结构，其特征在于，所述单体的多肽链折叠成一个三结构域结构，N端部分的结构是由两个结构域构成，C端是由一个侧面的α-螺旋结构组成；N端结构是由四个绳状结构，三个螺旋和一个310-螺旋组成，中间结构域主要由β-结构元素构成，包含7个β-折叠，8个反平行β-折叠，C端结构域与中间结构域相连，其核心包含5个β-折叠及两侧面的两个α-螺旋构成。

7.权利要求2所述晶体结构，其特征在于，所述晶体的空间群C121的参数为：

8.权利要求1所述晶体结构的解析方法，其特征在于，是利用冷冻液氮从培养液中结晶出单一晶体，通过X射线源获取的晶体数据。

9.权利要求8所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）从母液中可以获得晶体，利用液态氮气流快速冷冻，在100K下利用X射线源获得的晶体数据；

2）晶体结构可借助于基于类似芳香酸脱羧酶结构的相位器和I-TASSER模型利用分子替代法定向；

3）根据Matthew参数，一个不对称单位中含有八个单体，相位器中的溶液的最高LLG为497.9，最高TFZ为28.7，Rcryst为55.9%；利用Phenix和COOT软件对结构数据进行修正，获得Rcryst因子达到36.3%，Rfree因子达到46.4%的模型；

4）初始相关模型单体可用于获得MR的第二数据集合，同时，在不对称单位中发现八个蛋白质单体，初始模型可以根据步骤3）所述方法进行数据修正，结构模型可以通过TLS Motion Determination Server分析，再利用eight TLS groups进行数据细化，获得一个Rcryst因子为17.4%，Rfree因子为23.0%的模型，利用CCP4程序SFCHECK和PROCHECK对最终模型进行检查。