[发明专利]一种空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位筛选及功能鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测或疫苗研究领域，特别是一种通过利用生物信息学技术了解空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的跨膜结构、基因序列保守性、B细胞抗原表位及其抗原性等特征，并鉴定空肠弯曲菌主要外膜蛋白优势B细胞抗原表位，能用于空肠弯曲菌感染的检测诊断，以及为后续疫苗研究提供实验依据的一种空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位筛选及功能鉴定方法。

背景技术

空肠弯曲菌是引起人类急性腹泻常见的病原体之一，是全球范围内重要的食源性人兽共患病病原菌，其感染率在世界各地普遍呈上升趋势，引发的食品安全和食源性疾病问题也日益突出。空肠弯曲菌感染可引起人类急性肠炎和格林-巴利综合症等，还可感染动物导致牛和绵羊的流产，火鸡的肝炎和蓝冠病，雏鸡、犊牛、仔猪的腹泻等多种疾病。人们需要快速准确地检测空肠弯曲菌以便及时控制该病的暴发流行。但由于空肠弯曲菌培养营养要求高，条件特殊，传统的检测方法费时费力，严重制约了人们对于空肠弯曲菌感染的防治。另外，空肠弯曲菌全菌苗及突变株菌苗对空肠弯曲菌提供的保护性效果有限且不安全，因此人们急需寻求一种新型、安全、有效的空肠弯曲菌亚单位疫苗，这对于预防空肠弯曲菌感染具有重要的现实意义。

无论是空肠弯曲菌感染的血清学检测，还是保护性疫苗研究，筛选出特异性的保护抗原是其前提和基础。空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18是由omp18基因编码的分子质量为18kD的外膜蛋白，该蛋白在空肠弯曲菌中普遍存在，具有高度保守性、稳定性和特异性，是理想的空肠弯曲菌单克隆抗体的筛选抗原和疫苗候选抗原。抗原通过抗原表位与相应的淋巴细胞表面的抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答和发挥免疫效应。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供的一种空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位筛选及功能鉴定方法，就是基于对空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18进行结构和分子特征分析，通过筛选出空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18特异性B细胞抗原表位并进行功能鉴定，对于空肠弯曲菌抗体的特异性检测和疫苗研发提供候选抗原。

本发明所采用的技术方案是：

所述一种空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位筛选及功能鉴定方法是基于空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位筛选来进行的，并包括如下步骤：

(I)采用TMpred和TMHMM软件预测OMP18蛋白的跨膜结构域、采用ProDom和Pfam软件预测蛋白的功能结构域、采用BepiPred软件预测OMP18蛋白的线性B细胞表位、采用DNASTAR软件对OMP18蛋白中存在的二级结构、亲水性和抗原性进行分析，结果表明外膜蛋白OMP18定位于空肠弯曲菌外膜且不存在跨膜结构，存在三个线性B细胞表位，且具有良好的亲水性和抗原性；

(II)采用clustalw软件进行OMP18基因核苷酸序列同源性比较，该基因序列仅保守存在于不同空肠弯曲菌菌株中，且序列高度同源，相似度达99％；

(III)采用空肠弯曲菌全菌抗体IgG为一抗，基于ELISA技术对优势线性B细胞抗原表位进行检测筛选鉴定，发现三个B细胞抗原表位都能有效结合空肠弯曲菌全菌抗体；

通过上述三个步骤，建立起空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位筛选和鉴定方法，能为后续空肠弯曲菌感染的血清学方法建立及疫苗研发提供候选抗原。

本发明的有益效果是：

通过上述步骤及结果表明：所述一种空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位筛选及功能鉴定方法高效实用，作为一种新方法可操作性强，能完善后续空肠弯曲菌感染的血清学方法提供实验依据，能为疫苗的研发提供候选抗原，具有新颖性及实用价值。

附图说明

下面结合本发明的图形进一步说明：

图1是所述空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18跨膜结构预测结果示意图；

图2是所述空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞线性表位预测结果示意图；

图3是所述空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18亲水性、抗原性预测结果示意图；

图4是所述空肠弯曲菌OMP18基因核苷酸序列同源性比较示意图；

图5是所述空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞线性抗原表位ELISA筛选鉴定结果示意图。

具体实施方式