[发明专利]一种多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法

权利要求书

1.一种多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步，针对待测生物样品分别设计PCR特异性引物对；

第二步，使用上述特异性引物对在水油乳化剂中对相应的DNA模板进行微滴PCR扩增；

所述水油乳化剂具体配制方法为：25℃下，取1体积份的微滴PCR水相，以6秒/滴的滴速，匀速滴入到2体积份的微滴PCR油相中，混合后形成均匀的水油乳化剂，其包含大小不等的微滴；所述水油乳化剂中微滴的直径为1～8μm，每微升的水油乳化剂包含3×10⁶到1×10⁷个微滴；

第三步，PCR产物分离及纯化：收集微滴PCR扩增得到的PCR产物之后，经离心，取下层水相，清洁PCR产物或者直接进行相应的产物分析；

第四步，对PCR产物进行检测，使用变性梯度凝胶电泳进行检测。

2.根据权利要求1所述的多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，其特征在于，所述待测生物样品和对应的特异性引物对如下所示：

玉米內源基因IVRL引物为：

IVRL-fp1：5’-GTATCACAAGGGCTGGTACC-3’

IVRL-fp2：5’-CCGTCTAGAGCATGACGATC-3’。

3.根据权利要求1所述的多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，其特征在于，所述微滴PCR水相组成为：

4.根据权利要求1所述的多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，其特征在于，所述微滴PCR油相各组分的体积百分比为：司盘804.5%，吐温800.4%，曲拉通X-1000.05%，石蜡油95.05%。

5.根据权利要求1所述的多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，其特征在于，第三步中，使用Anygen AxyPrep PCR清洁试剂盒对PCR产物进行清洁。