[发明专利]一种甾体生物碱含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甾体生物碱含量的测定方法。

背景技术

传统提取生物碱的方法有煎煮法、浸渍法、回流法和渗漉法操作简单易行，能够提取较多的有效成分，但提取过程中存在着能耗大、有效成分损耗大、杂质较多、效率较低等问题。随着物理科学的发展，针对传统提取过程中存在的问题，一些新技术应用于生物碱提取工艺中，新技术的强化作用或流体在超临界状态下进行萃取，大大提高了提取效率，降低了过程能耗，因其显著优势而成为研究热点。孙志良等探索出提取白毛藤生物碱比较合适的方法：生物碱及其生物碱盐都能溶于甲醇或乙醇，但甲醇毒性很大，应采用95％乙醇回流提取，然后减压回收溶剂得生物碱粗品，将生物碱粗品溶于酸水，用亲脂性有机溶剂除去不溶于水的脂溶性杂质，再酸水碱化使生物碱游离，用氯仿萃取，回收氯仿得到脂溶性生物碱。剩下的碱性水母液需用极性较大的有机溶剂正丁醇萃取，回收正丁醇得到水溶性生物碱。

发明内容

针对现有技术的上述不足，本发明的目的是提供一种甾体生物碱含量的测定方法，利用超声技术，溶剂使用量相对较少，降低成本，利用旋转蒸发器减压蒸馏溶剂，借助于真空泵降低系统内压力，降低液体的沸点，较低温度下得到生物碱浓缩液。

为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种甾体生物碱含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)生物碱的提取与制备：将待测器官洗净37℃下烘干，并粉碎至40目，准确称取1.0g，置于超声波清洗器中用50m195％乙醇水溶液超声提取30min，以同样的方法超声提取第二次，经过滤渣弃去，合并二次滤液，利用旋转蒸发器减压蒸馏浓缩，挥发回收乙醇，得浓缩液，浓缩液溶于稀酸溶液至pH值为3，过滤，滤液加氨水至pH值为10，过滤，得清夜，置冰箱中备用；

(2)精密称取步骤(1)中制备的样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用；

(3)高效液相色谱分析测定峰面值：所述的液相色谱条件如下：

色谱柱：Cosmosil5C18AR-II(250×4.6mm)；

流动相：乙腈—磷酸二氢钾(75：25)；

检测波长：205nm；流速：1.0mL/min；

进样量10μL，柱温:25℃；

(4)标准曲线的建立：精密吸取对照品0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg用冰乙酸定容至5mL，在20℃静置一定的时间备用，以步骤(3)中的液相条件，高效液相色谱分析法测定各浓度对照品的吸光度，对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程：y＝1185050.6095x-37397.6623，其中y为吸光度，x为样品含量，其中相关系数r＝0.9960，r为样品含量与吸光度二组数据间的相关性，与朗伯·比尔定律相符；

(5)甾体生物碱含量的测定：根据步骤(3)中测得的峰面值和步骤(4)中的回归方程y＝1185050.6095x-37397.6623，其中y为峰面值，x为样品碱含量，计算出样品的甾体生物碱含量。

本发明的有益效果如下：

本发明甾体生物碱含量的测定方法，利用超声技术缩短提取时间、提高提取率，并且无需加热，提高了热敏性生物碱的提取率且对其生理活性基本没有影响，溶剂使用量相对较少，降低成本。利用旋转蒸发器减压蒸馏溶剂，借助于真空泵降低系统内压力，降低液体的沸点，较低温度下得到生物碱浓缩液。高效液相色谱分析法具有高、灵敏度高、分离速度快，适用范围广、重现性好、操作方便等优点。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。

实施例1--6

本发明的甾体生物碱含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)生物碱的提取与制备：将待测器官洗净37℃下烘干，并粉碎至40目，准确称取1.0g，置于超声波清洗器中用50m195％乙醇水溶液超声提取30min，以同样的方法超声提取第二次，经过滤渣弃去，合并二次滤液，利用旋转蒸发器减压蒸馏浓缩，挥发回收乙醇，得浓缩液，浓缩液溶于稀酸溶液至pH值为3，过滤，滤液加氨水至pH值为10，过滤，得清夜，置冰箱中备用；此步骤(1)分别制备6组，编号为1-6；

(2)精密称取步骤(1)中制备的6组样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用；

(3)高效液相色谱分析测定6组样品的峰面值见表1：

表1