[发明专利]利用超声波及酶解技术制备鹿血血红素方法

说明书

技术领域

本发明属于食品生物化学领域，具体涉及一种应用超声波及酶解制备鹿血血红素的方法。

背景技术

血红素是一种优良的铁强化剂及抗贫血药，以被药理和临床研究所证实，作为补血剂可直接被人体吸收，有明显的增升白细胞及血小板的作用，疗效显著，副作用少；血红素还是制备治癌症药物的原料。从鹿血红细胞提取血红素，不但可以预防和改善缺铁性贫血，还可以同鹿血中丰富的活性营养成分共同或协同作用对人体健康益处甚大。由于血红素的重要价值，近年来，引起了研究者的，广泛关注，探索出许多新的提取方法。酶法提取血红素由于不使用有机溶剂，是最环保的一种提取方法，但收率较低。

发明内容

本发明的目的是提供利用超声波及酶解技术制备鹿血血红素方法，利用超声波对鹿血红细胞进行破碎，在利用碱性蛋白酶水解鹿血红细胞，提高了鹿血血红素的提取率。

利用超声波及酶解技术制备鹿血血红素方法，其特征在于所述方法步骤如下：

(1)新鲜鹿血中加入一定浓度的抗凝血剂柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀、得到新鲜抗凝鹿血，取100mL抗凝血于离心管中，离心25min，倾出上清液(血清)收集红血球后，盐水洗3次，得到干净的红血球。加入去离子水，用电动搅拌机搅拌，红血球吸水胀裂，血红蛋白从红细胞中分离出来，过滤出纤维，滤液备用。

(2)将上述中的血红细胞加入一定量的水，在一定功率的超声波设备进行破碎，破碎一定时间。

(3)将上述中的溶液用一定量碱性蛋白酶进行再适当的温度，pH，酶解。

(4)分离，冷冻干燥。

本发明研究了红细胞浓度、设备破碎功率、破碎时间值对血红细胞破碎的影响。在单因素试验结果的基础上，确定了各因素的水平设置范围，根据单因素试验的结果，采用二次旋转试验方法，根据试验结果，确定最优的水平组合。

同时研究了添加碱性蛋白酶的料液比、提取温度、提取pH值、提取时间对血红素提取率的影响。

通过单因素试验得出，V红细胞：V水为1∶5、超声波设备功率200W、破碎时间10min。经多二次旋转试验方法进一步优化，V红细胞：V水为1∶5、设备破碎功率185W、破碎时间9min、提取血红素得率和纯度最大。

通过单因素试验得出，当提取pH值为8.5、提取时间为120min、料液比为5000u/g、提取温度为50℃时，在各个因素下的血红素提取率较大。

本发明对于使用单一酶进行酶解，所得到的鹿血血红素相比，所得鹿血血红素提取率增高。

附图说明

图1为红细胞浓度对血红素产量和水解度的影响；

图2为超声波破碎功率对血红素得率和纯度的影响；

图3超声波破碎时间对血红素得率和纯度的影响；

图4酶解时间对血红素的纯度和得率的影响；

图5酶解温度对血红素产量和纯度的影响；

图6酶解pH对血红素纯度和得率的影响；

图7酶底物浓度比对血红素纯度和得率的影响。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式按照下述方法制备鹿血血红素

(1)新鲜鹿血中加入1％的抗凝血剂柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀、得新鲜抗凝鹿血；取100mL抗凝血于离心管中，以4500r·min-1转速离心25min，倾出上清液(血清)收集红血球后，盐水洗3次，得到干净的红血球。加入是红血球体积2倍的去离子水，用电动搅拌机搅拌30min，红血球吸水胀裂，血红蛋白从红细胞中分离出来，过滤出纤维，滤液备用。

(2)将备用的V血红细胞与V水，按照1∶1～1∶9的浓度配置，在100～300w功率的超声波设备进行破碎，破碎时间为0～30min；

(3)添加碱性蛋白酶，加入底物浓度为2000μ/g～6000μ/g，pH为7.5～9，调整温度为40～60℃，酶解时间为30～150min。

(4)分离，冷冻干燥，得到产品。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，本实施方式按照下述方法制备鹿血血红素：

(1)新鲜鹿血中加入1％的抗凝血剂柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀、得到新鲜抗凝鹿血；取100mL抗凝血于离心管中，以4500r·min-1转速离心25min，倾出上清液(血清)收集红血球后，盐水洗3次，得到洗干净的红血球。·加入是红血球体积2倍的去离子水，用电动搅拌机搅拌30min，红血球吸水胀裂，血红蛋白从红细胞中分离出来，过滤出纤维，滤液备用。