[发明专利]含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体及其腺病毒和应用有效
| 申请号： | 201410249547.5 | 申请日： | 2014-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN104004778A | 公开（公告）日： | 2014-08-27 |
| 发明（设计）人： | 周勇;温平;申友锋;杨晓芳;李建均;何久香;王蜀英;牟浪;陈小雨 | 申请（专利权）人： | 重庆高圣生物医药有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 王贵君 |
| 地址： | 400039 重庆市九龙坡区二*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 含有 crispr cas9 系统 靶向 载体 及其 病毒 应用 | ||
1.含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于：所述靶向敲除载体由pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9质粒用EcoRI和SacII酶切、补平后连接经BstXI酶切、补平的pAdTrack-CMV质粒，然后用BbsI线性化后连入目的基因的特异靶序列，再用PmeⅠ线性化和CIAP碱性磷酸酶去磷酸化后与pAdEasy-1质粒重组而得。
2.根据权利要求1所述含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于：所述目的基因为GFP或c-myc基因。
3.根据权利要求2所述含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于：目的基因为GFP的特异靶序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.7所示。
4.根据权利要求2所述含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于：目的基因为c-myc基因的特异靶序列如SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.15或SEQ ID NO.18所示。
5.根据权利要求4所述含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于：所述特异靶序列如SEQ ID NO.12所示。
6.含有权利要求1-5任一项所述靶向敲除载体的腺病毒。
7.权利要求1-5任一项所述靶向敲除载体在制备突变特异靶序列的试剂中的应用。
8.权利要求5所述靶向敲除载体在制备抑制肿瘤的试剂中的应用。
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