[发明专利]一种从山小桔中提取5-羟基去甲山柚柑碱的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种从山小桔中提取5-羟基去甲山柚柑碱的方法。

背景技术

5-羟基去甲山柚柑碱为吖啶生物碱，CAS登录号27067-70-5，分子式C₁₉H₁₇NO₄，分子量为323.35。5-羟基去甲山柚柑碱具有抗癌活性，抑制肿瘤细胞生长；抑制病毒作用，对Epstein-Bars病毒在1000Mratio/TPA浓度时有100%的抑制活性，用于抗肿瘤促进剂；抗疟活性。体外10μg/mL浓度时，对约尔疟原虫(Plasmodium yuelii)抑制率为88%。

山小桔为芸香科植物，味微辛、苦，性平。有行气祛痰、散瘀消肿、消积的功效。治感冒咳嗽、食积腹痛、跌打肿痛、小肠疝气痛。

通过文献检索，国内未见5-羟基去甲山柚柑碱的提纯制备方法。目前，生物碱多采用有机试剂提取和硅胶柱分离。此类方法操作繁琐，制备量小，很难实现工业化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单的从山小桔中提取5-羟基去甲山柚柑碱的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从山小桔中提取5-羟基去甲山柚柑碱的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取山小桔根粉碎，加5-10倍量5%盐酸水溶液浸泡提取2-3次，提取液加入超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，浓缩液加入阳离子大孔树脂吸附，氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩液加入氯仿萃取，回收氯仿，得粗提物；

2）上述粗提取物用75%甲醇溶液溶解，加入氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液加入适量石油醚结晶，结晶物再用丙酮溶液重结晶，干燥即得。

所述步骤1）超滤膜为截留分子量3000-10000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量200-300的中纤维素纳滤膜。

所述步骤1）中的氨水溶液洗脱为：6-10倍柱体积5%-10%的氨水溶液洗脱。

采用上述技术方案生产5-羟基去甲山柚柑碱，，方法操作简单，所得产品纯度高，生产过长的酸水，可以循环利用，减少了污染，而且易于实现工业化。

具体实施方式

   下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

取干燥的山小桔根10kg，粉碎，加5倍量5%盐酸水溶液浸泡提取3次，提取液加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量200的中纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加入732阳离子大孔树脂吸附，水洗中性，用10倍柱体积10%的氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至密度1.05，浓缩液加入氯仿萃取3次，回收氯仿，所得粗提物用75%甲醇溶液回流溶解，加1/2体积的氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液至1/5体积放置结晶，结晶物滤出，用10倍量90%丙酮溶液重结晶，干燥得5-羟基去甲山柚柑碱13g，经HPLC检测，含量98.2%。

 实施例2：

 取干燥的山小桔根10kg，粉碎，加5倍量5%盐酸水溶液浸泡提取3次，提取液加入截留分子量6000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量300的中纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加入732阳离子大孔树脂吸附，水洗中性，用6倍柱体积8%的氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至密度1.02，浓缩液加入氯仿萃取2次，回收氯仿，所得粗提物用75%甲醇溶液回流溶解，加入1/3氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液至1/6体积放置结晶，结晶物滤出，用8倍量80%丙酮溶液重结晶，干燥得5-羟基去甲山柚柑碱11g，经HPLC检测，含量97.3%。

 实施例3：

取干燥的山小桔根10kg，粉碎，加5倍量5%盐酸水溶液浸泡提取3次，提取液加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量200的中纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加入732阳离子大孔树脂吸附，水洗中性，用7倍柱体积5%的氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至密度1.03，浓缩液加入氯仿萃取3次，回收氯仿，所得粗提物用75%甲醇溶液回流溶解，加入1/2氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液至1/8体积放置结晶，结晶物滤出，用8倍量90%丙酮溶液重结晶，干燥得5-羟基去甲山柚柑碱13.2g，经HPLC检测，含量97.1%。