[发明专利]细胞培养微沟道中注入溶液的方法以及贴壁细胞培养方法

权利要求书

1.一种细胞培养微沟道中注入溶液的方法，其特征在于：

该细胞培养沟道位于一微流控芯片中，包括：形成于微流控芯片内的微沟道本体；以及微沟道本体左右两侧的与外界相连通的液滴入口；

该细胞培养微沟道中注入溶液的方法包括：

步骤B：用两支移液枪吸取不同量的溶液，分别对准两侧的液滴入口，同时向细胞培养微沟道内注入溶液，在两侧液面差的作用下，溶液依靠重力作用流入微沟道本体内。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞培养微沟道呈U型结构；

微沟道本体的纵剖面为矩形，液滴入口的横切面为圆形，其中液滴入口的直径大于微沟道本体的宽度。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B之前还包括：

步骤A：用一支移液枪吸取浸润缓冲液，对准微沟道本体一侧的液滴入口，向细胞培养微沟道内注入浸润缓冲液，使细胞培养微沟道完全被该浸润缓冲液浸润，而后静置预设时间。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤B中，所述浸润缓冲液为磷酸盐缓冲液，所述预设时间至少为1小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B中，其中一支移液枪吸取溶液的量为20μl，另外一支移液枪吸取溶液的量为10μl或15μl。

6.一种贴壁细胞培养方法，其特征在于，基于微流控技术，包括：

步骤A：提供包括若干条细胞培养微沟道的微流控芯片，其中，每一条细胞培养微沟道包括：形成于微流控芯片内的微沟道本体以及微沟道本体两侧的液滴入口；

步骤B：对细胞培养微沟道进行表面修饰，以便于贴壁细胞的接种；

步骤C：将吸壁细胞悬液用培养液调整至预设浓度，用两支移液枪吸取不同量的吸壁细胞悬液，分别对准左右两侧的液滴入口，同时向细胞培养微沟道内注入吸壁细胞悬液，在两侧液面差的作用下，吸壁细胞悬液依靠重力作用流入微沟道本体内；以及

步骤D：在细胞培养微沟道内对吸壁细胞进行培养，每间隔预设时间，用移液枪吸出每个液滴入口处的培养液，并用两支移液枪在两端的液滴入口同时滴入新鲜的培养液。

7.根据权利要求6所述的贴壁细胞培养方法，其特征在于，所述步骤B包括：

子步骤B1：对微流控芯片进行紫外光照射灭菌；

子步骤B2：用移液枪对准细胞培养微沟道一侧的液滴入口，向其中注入磷酸盐缓冲液，使细胞培养微沟道完全浸润，而后静置至少1小时；

子步骤B3：用移液枪将液滴入口处的磷酸盐缓冲液吸出；

子步骤B4：用两支移液枪吸取不同量的含有修饰分子的溶液，分别对准两侧的液滴入口，同时向细胞培养微沟道内注入含有修饰分子的溶液；

子步骤B5：静置预设时间，使溶液中的修饰分子沉降于细胞培养微沟道底面，形成修饰层；以及

子步骤B6：用两支移液枪吸取不同量的培养液，分别对准细胞培养微沟道左右两侧的液滴入口，同时注入培养液，静置至少1小时，而后吸出培养液。

8.根据权利要求6所述的贴壁细胞培养方法，其特征在于，所述贴壁细胞为VSMC细胞。

9.根据权利要求8所述的贴壁细胞培养方法，其特征在于，所述步骤D之后还包括：

步骤E，对细胞培养微沟道内的VSMC细胞进行α肌动蛋白的细胞免疫染色。

10.根据权利要求9所述的贴壁细胞培养方法，其特征在于，所述步骤E的染色步骤包括：

用移液枪分别吸出液滴入口中所有溶液；

用两支移液枪吸取不同量的目标溶液，分别对准细胞培养微沟道左右两侧的液滴入口，同时向细胞培养微沟道内注入目标溶液。