[发明专利]蜡状芽孢杆菌ZJB-11071及其应用

权利要求书

1.蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)ZJB-11071，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国·武汉·武汉大学，430072，保藏编号CCTCC No：M2013314，保藏日期2013年7月5日。

2.如权利要求1所述的蜡状芽孢杆菌ZJB-11071在生物催化卤代醇生成环氧化物中的应用，其特征在于所述的应用为：以蜡状芽孢杆菌ZJB-11071经发酵培养后的湿菌体为催化剂，以卤代醇为底物，于pH值为7.0～7.5的缓冲液中，在35℃下进行转化反应，转化反应结束后，将转化反应液用乙酸乙酯萃取，离心，取上层有机相即为含有环氧化物的混合液，将混合液分离纯化，获得所述环氧化物。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述催化剂的用量以湿菌体质量计，终浓度为30～80g/L，所述底物的初始浓度为20～50mmol/L。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述卤代醇为1,3-二氯-2-丙醇、2,3-二氯-2-丙醇或1,3-二溴-2-丙醇。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下方法制备：

(1)斜面培养

将蜡状芽孢杆菌ZJB-11071接种至斜面培养基，在30℃培养12h，获得斜面菌体；

所述斜面培养基终浓度组成为：NaCl10.0g/L，酵母粉5.0g/L，蛋白胨10.0g/L，琼脂20.0g/L，溶剂为水，pH值为7.0；

(2)种子培养

从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基，在30℃培养24h，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成为：NaCl10.0g/L，酵母粉5.0g/L，蛋白胨10.0g/L，溶剂为水，pH值为7.0；

(3)发酵培养

将种子液以体积浓度1％的接种量接种至发酵培养基中，30℃，150rpm振荡培养60h后，在12000g下离心5min，收集湿菌体；

所述发酵培养基终浓度组成为：乳糖8g/L，蛋白胨6g/L，Na₂HPO₄3.2g/L，K₂HPO₄1.5g/L，Na₂EDTA0.06g/L，MnSO₄0.002g/L，MgSO₄0.001g/L，ZnSO₄0.002g/L，FeSO₄0.01g/L，溶剂为水，pH值为6.8。

6.如权利要求1所述的蜡状芽孢杆菌ZJB-11071在生物催化合成手性药物中间体中的应用，其特征在于所述的应用为：以蜡状芽孢杆菌ZJB-11071经发酵培养后的湿菌体为催化剂，以S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物，于pH值为7.0～7.5的缓冲液中，在35℃下进行转化反应，转化反应结束后，将转化反应液用乙酸乙酯萃取，离心，取上层有机相，将混合液分离纯化，获得R(-)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述催化剂的用量以湿菌体质量计，终浓度为30～80g/L，所述底物的初始浓度为20～50mmol/L。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下方法制备：

(1)斜面培养

将蜡状芽孢杆菌ZJB-11071接种至斜面培养基，在30℃培养12h，获得斜面菌体；

所述斜面培养基终浓度组成为：NaCl10.0g/L，酵母粉5.0g/L，蛋白胨10.0g/L，琼脂20.0g/L，溶剂为水，pH值为7.0；

(2)种子培养

从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基，在30℃培养24h，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成为：NaCl10.0g/L，酵母粉5.0g/L，蛋白胨10.0g/L，溶剂为水，pH值为7.0；

(3)发酵培养

将种子液以体积浓度1％的接种量接种至发酵培养基中，30℃，150rpm振荡培养60h后，在12000g下离心5min，收集湿菌体；

所述发酵培养基终浓度组成为：乳糖8g/L，蛋白胨6g/L，Na₂HPO₄3.2g/L，K₂HPO₄1.5g/L，Na₂EDTA0.06g/L，MnSO₄0.002g/L，MgSO₄0.001g/L，ZnSO₄0.002g/L，FeSO₄0.01g/L，溶剂为水，pH值为6.8。