[发明专利]5-羟基去甲山柚柑碱在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及5-羟基去甲山柚柑碱在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

5-羟基去甲山柚柑碱为吖啶生物碱，CAS登录号27067-70-5，分子式C₁₉H₁₇NO₄，分子量为323.35，分子结构式：

 

药理研究显示，5-羟基去甲山柚柑碱具有抗癌活性，抑制肿瘤细胞生长；抑制病毒作用，对Epstein-Bars病毒在1000Mratio/TPA浓度时有100%的抑制活性，用于抗肿瘤促进剂；抗疟活性。体外10μg/mL浓度时，对约尔疟原虫(Plasmodium yuelii)抑制率为88%。

山小桔为芸香科植物，味微辛、苦，性平。有行气祛痰、散瘀消肿、消积的功效。治感冒咳嗽、食积腹痛、跌打肿痛、小肠疝气痛。

通过文献检索， 国内尚未见5-羟基去甲山柚柑碱用于制备抗肿瘤药物。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，应用5-羟基去甲山柚柑碱制备抗肿瘤药物。

本发明的技术方案如下：

本发明所述的5-羟基去甲山柚柑碱，其制备方法包括以下步骤：

（1）取山小桔根粉碎，按固液体积比为5：1.5-2加入夹带剂，在压力22-35MPa，温度35-48℃条件下，通入液态CO₂萃取90-180min，在压力7-9MPa，温度30-35℃条件下解析，收集萃取液；

（2）将步骤（1）中得到的萃取液加硅藻土搅拌脱色，过滤得到脱色液；

（3）将步骤（2）中得到的脱色液浓缩至相对密度为1.12，上中性氧化铝柱，用石油醚-乙酸乙酯洗脱纯化，得到5-羟基去甲山柚柑碱粗品；

（4）粗品经过制备型高效液相色谱精制得到高纯度的5-羟基去甲山柚柑碱。

所述步骤（1）中，夹带剂为甲醇或乙醇溶液。

所述步骤（2）中，硅藻土加入量为药材量的3-4.5%

所述步骤（3）中，石油醚-乙酸乙酯的体积比为3:14。

所述步骤（4）中，制备型高效液相色谱流动相为甲醇-乙腈-水，体积比为19:38:45。

5-羟基去甲山柚柑碱在制备抗肿瘤药物中的应用。

通过体外肿瘤细胞体外抑制试验，观察5-羟基去甲山柚柑碱的抗肿瘤作用，结果表明5-羟基去甲山柚柑碱对A549肺癌和HT29结肠癌均有一定的抑制作用，具有显著抗癌活性，且其毒副作用小。

本发明的有益效果通过以下实验得到了验证：

实验方法：

1、受试提取物：5-羟基去甲山柚柑碱提取物

（1）性状：结晶，味苦。

（2）规格：含5-羟基去甲山柚柑碱≥90%。

（3）溶剂：乙醇或甲醇。

（4）储存条件：4℃，密封保存。

2、细胞株：肺癌细胞株A549、结肠癌细胞株HT29。 

3、给药剂量和方法

5-羟基去甲山柚柑碱组：10mg/kg/天，灌胃给药，隔一天一次，共五天。

阴性对照组：10mg/kg/天，生理盐水肌注给药，隔一天一次，共五天。

阳性对照组：30mg/kg/天，5-氟尿嘧啶肌注给药，隔一天一次，共五天。

灌胃后2h，用HPLC检测血浆药物浓度。

4、种植瘤模型的建立与给药

（1）皮下种植：分别将上述细胞培养至90%融合，收集细胞，取2×10 ⁶细胞悬液，注射至小鼠肋下皮下组织，于术后15天取材，称量瘤重。另取同样模型，观察30天，计算药物对模型动物存活率的影响。

（2）肺内种植瘤肺转移模型：取2×10 ⁶细胞悬液注射至小鼠脾包膜内，于术后15天取肺，测量瘤重和肺转移数。

（3）给药方式：种植瘤细胞同时给药。

5、结果

结果如表1、表2和表3显示，5-羟基去甲山柚柑碱组用药均有不同程度的抑制肿瘤生长和转移的作用，可延长实验小鼠的生存期。

表1  5-羟基去甲山柚柑碱对种植瘤的抑制作用（n=20，±S）

表2  5-羟基去甲山柚柑碱对肿瘤转移发生率的影响（n=20，%）

表3  5-羟基去甲山柚柑碱对实验小鼠生存率的影响（n=20，%）