[发明专利]一种多重信号放大的免标记电化学传感器及对核酸的检测

权利要求书

1.一种多重信号放大的免标记电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)连接探针1和捕获探针在金纳米粒子上固定，形成连接探针1-捕获探针-金纳米粒子聚合物，即S1-CP-AuNPs聚合物，其中，连接探针1的核苷酸序列为5’-SH-C6-TTT TTC GTG AGC AGC GTC AG-3’，捕获探针的核苷酸序列为5'-SH-C6-AAA GGG TTG GGC GGG ATG GGT TGAGTC TTC C↓AG TGT GAT GAA ACC CAT C-3'；

(2)石墨烯分散在壳聚糖溶液中，形成壳聚糖-石墨烯聚合物，即CS-GR复合物；

(3)在基底电极表面修饰CS-GR复合物，得壳聚糖-石墨烯/基底电极，即CS-GR/基底电极；

(4)将壳聚糖-石墨烯/基底电极处理后，浸在连接探针2中，得连接探针2/壳聚糖-石墨烯/基底电极，即S2/CS-GR/基底电极，其中，连接探针2的核苷酸序列为5’-NH₂-C6-TTT TTT TCT GAC GCT GCT CAC G-3’；

(5)将S2/CS-GR/基底电极浸在S1-CP-AuNPs聚合物中，通过S1和S2间碱基互补配对将S1-CP-AuNPs固定在S2/CS-GR/基底电极上，制得连接探针1-捕获探针-金纳米粒子/连接探针2/壳聚糖-石墨烯/基底电极，即传感器S1-CP-AuNPs/S2/CS-GR/GCE。

2.根据权利要求1所述的一种多重信号放大的免标记电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，基底电极为玻碳电极。

3.根据权利要求1或2所述的一种多重信号放大的免标记电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中连接探针1和捕获探针在金纳米粒子上固定，连接探针1和捕获探针中分别加入三(2-氯乙基)磷酸酯TCEP，室温避光处理1小时；将上述两溶液混合加入到金纳米粒子中，室温避光搅拌；搅拌的过程中逐滴加入三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液Tris-HCl，再逐滴加入NaCl溶液，室温避光搅拌；将上述溶液离心，将沉淀重新分散在Tris-HCl 和NaCl的混合溶液中，即得连接探针-捕获探针-金纳米粒子聚合物，即S1-CP-AuNPs聚合物。

4.根据权利要求2所述的一种多重信号放大的免标记电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，玻碳电极用三氧化二铝粉打磨成镜面后清洗，晾干后，将CS-GR复合物滴涂在玻碳电极上，室温晾干，制得壳聚糖-石墨烯/玻碳电极，即CS-GR/GCE。

5.根据权利要求2所述的一种多重信号放大的免标记电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，壳聚糖-石墨烯/玻碳电极浸在戊二醛溶液中，然后清洗；将清洗后的壳聚糖-石墨烯/玻碳电极浸在连接探针S2中，制得连接探针/壳聚糖-石墨烯/玻碳电极，即S2/CS-GR/GCE。

6.根据权利要求2所述的一种多重信号放大的免标记电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述清洗，是在二次水中清洗3～5分钟，然后依次在乙醇和二次水中超声3～5分钟。

7.根据权利要求2所述的一种多重信号放大的免标记电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述清洗，是分别在NaOH溶液和10mmol/L pH 7.4的Tris-HCl缓冲液中。

8.权利要求1制备的一种多重信号放大的免标记电化学传感器。