[发明专利]一种液体型凝血酶时间检测试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种液体型凝血时间(TT)检测试剂及其制备方法。

背景技术

凝血酶时间(Thrombin time，TT)检测的原理是适量的凝血酶将血浆样品中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，凝固所需的时间即为凝血酶时间(TT)。

凝血酶时间是检测凝血、抗凝及纤维蛋白溶解系统功能的一个简便试验，其检测对临床的疾病诊断有重要价值。

凝血酶时间检测测定过程受多种因素的影响，其中试剂的质量是关键因素，由于目前国产的凝血试剂普遍存在产品质量不稳定、敏感性差的问题，致使检测结果不稳定，不同的临床检验实验室之间测得的结果难以比较，因此目前临床实验室所使用的试剂绝大部分为进口产品，价格昂贵。另一方面，由于试剂中重要组分——凝血酶的稳定性不好，目前国内外的凝血酶试剂几乎均为冻干粉剂型，使用前需要进行复溶，操作麻烦、瓶间差异大，且试剂复溶后质量稳定性差。而液体型的试剂虽然可以直接使用，方便操作，瓶间差小，更适合自动化仪器的操作，但因为长期保存过程中，稳定性不理想，限制了其应用。

发明内容

本领域需要开发一种稳定的液体型的凝血酶时间检测试剂，基于此，本发明提供了一种液体型凝血酶时间检测试剂及其制备方法。

为了实现上述发明目的，本发明采取了以下技术方案：

一种液体型凝血酶时间检测试剂，含有凝血酶、氨基酸、聚乙二醇、甘露醇、牛血清白蛋白、明胶，且溶剂为水。

其pH值为6.0～8.0。

所述氨基酸选自甘氨酸或丙氨酸。

所述聚乙二醇的分子量范围在8000-20000。

所述凝血酶的酶活性为5～80IU/mL。

还包括缓冲盐。

还包括叠氮化钠。

所述氨基酸的质量体积百分比为1％～5％；

聚乙二醇的质量体积百分比为0.4％～1％；

甘露醇的质量体积百分比为3％～10％；

牛血清白蛋白的质量体积百分比为3％～12％；

明胶的质量体积百分比为0.1％～0.5％。

一种液体型凝血酶时间检测试剂的制备方法，包括：

将氨基酸、聚乙二醇、甘露醇、牛血清白蛋白、明胶溶解在水中得到凝血酶保护液，调节pH值6.0～8.0；

取凝血酶冻干粉溶解在所述凝血酶保护液中，得到所述液体型凝血酶时间检测试剂，所述液体型凝血酶时间检测试剂中凝血酶的酶活性为5～80IU/mL。

取凝血酶冻干粉溶解在所述凝血酶保护液中，得到所述液体型凝血酶时间检测试剂的步骤包括：

取凝血酶冻干粉溶解在所述凝血酶保护液中得到凝血酶母液，所述凝血酶母液中凝血酶的酶活性为3000～10000IU/mL；

将所述凝血酶母液用所述凝血酶保护液分别稀释，获得若干稀释度溶液并滴定，根据滴定结果选取一个稀释度；

根据所述稀释度，用所述凝血酶保护液稀释所述凝血酶母液，得到所述液体型凝血酶时间检测试剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1)试剂生产过程简化，生产设备简单，无冻干过程，生产成本低；

2)使用为即开即用型，不需复溶，操作方便；

3)不存在因所用水的质量或体积差异造成的差异，瓶间变异在3％以内；

4)试剂稳定性高，瓶间一致性好，37℃热稳定在30天以上，2～8℃密封储存可稳定18个月以上；

5)综合比价，本发明方法制备的液体试剂较市面普遍使用的干粉试剂具有明显优势。

附图说明

图1为本发明凝血酶时间检测试剂制备方法流程示意图。

图2是本发明凝血酶时间检测试剂制备方法流程第二示意图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示进一步阐述本发明。

参照图1，一种液体型凝血酶时间检测试剂制备方法，包括以下步骤：

将氨基酸、聚乙二醇、甘露醇、牛血清白蛋白、明胶溶解在水中得到凝血酶保护液，调节pH值6.0～8.0；

取凝血酶冻干粉溶解在所述凝血酶保护液中，得到所述液体型凝血酶时间检测试剂，所述液体型凝血酶时间检测试剂中凝血酶的酶活性为5～80IU/mL。

如图2所示，一种液体型凝血酶时间检测试剂制备方法，包括以下步骤：