[发明专利]一种小麦种子高分子量谷蛋白亚基检测样品的制备方法有效
| 申请号： | 201510073536.0 | 申请日： | 2015-02-11 |
| 公开（公告）号： | CN104655464B | 公开（公告）日： | 2017-06-23 |
| 发明（设计）人： | 张平平;马鸿翔;姚金保;张鹏;杨丹;王化敦 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司32200 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 小麦 种子 分子量 谷蛋白 检测 样品 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种小麦种子高分子量谷蛋白亚基检测样品的制备方法，其特征在于：在96孔微孔板中一步提取，96孔微孔板为实验室通用的容积为200uL的PCR扩增用微孔板，该微孔板配有塑料联排孔盖和每孔1粒直径2mm的钢珠，其步骤包括：在小麦种子无胚端切取其体积的1/4～1/5，置于200uL的96孔PCR扩增用微孔板中，并在每个微孔中放入1粒直径2mm的钢珠；随后在微孔板中加入40uL浸泡缓冲液静置过夜，再加入120uL提取缓冲液，经高通量研磨器研磨后，在60℃的烘箱静置，期间每静置14min，漩涡震荡一次1min，两次共30min，微孔板经离心后所得上清液为小麦高分子量谷蛋白亚基检测所需样本；
其中
浸泡缓冲液：25％正丙醇+0.04M Tris-HCl PH8.0；
提取缓冲液：25％正丙醇+0.04M Tris-HCl PH8.0+3.0％SDS+1.3％DTT+2.0％4-VP；
碾磨使用高通量组织碾磨仪，碾磨频率为30次/s，碾磨时间为2min；微孔板离心条件为4000rpm×15min。
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