[发明专利]模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽。

背景技术

乳清是生产干酪、干酪素的主要副产物，一般每生产1 kg干酪可得到8～9 kg乳清。但其利用率仅占50 %左右，其余乳清均作为饲料或者直接作为废水排放掉，这样不仅浪费了宝贵的食物资源，同时也造成了严重的环境污染。乳清蛋白容易消化，具有很高代谢效率和生物利用效价，近年来的研究表明在乳清蛋白多肽链内部可能普遍存在着功能区，蕴藏着许多生物活性肽，通过蛋白酶水解释放出来即可在体内发挥特定的生理功能。人类的衰老与人体代谢所产生的氧化物有关，特别是自由基的产生，它会产生许多对人体及细胞的不良影响，引起脂质氧化反应从而生成对人体有害的难以降解的脂褐素，攻击生命大分子物质，破坏细胞内DNA、蛋白质以及细胞膜，诱导细胞凋亡，加速人体衰老。同时，自由基过多，也会诱发一系列疾病，如老年痴呆症、脑血栓、动脉粥样硬化和癌症等。因此，探寻能有效清除自由基的物质成分非常有必要。

天然蛋白来源的抗氧化肽因其分子量小、易吸收、清除自由基活性强、安全性高等特点，在医药、化妆品、保健品和食品与饲料添加剂等方面有广阔的应用前景。但目前抗氧化肽的分离纯化过程一般较繁琐，成本较高，不能满足大规模生产的需求。

发明内容

本发明对于上述现有技术的不足，提供了一种模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽。

本发明的模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽，其操作步骤如下：

a、预处理：将1份乳清蛋白粉与10～35份水混合，在95℃下恒温5min后，降温至45℃～60℃，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0～8.5，制成乳清蛋白溶液；

b、酶解：在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入碱性蛋白酶0.005～0.02份，同时用NaOH溶液维持系统的pH为7.0～8.5，在45℃～60℃的条件下搅拌2.0～6.0h后，再加入胰蛋白酶0.005～0.02份，仍维持反应液pH为7.0～8.5，在45℃～60℃的条件下搅拌1.0h～3.0h，然后升温至85℃～100℃，保持10min～15min，制得乳清蛋白酶解液；

c、分离：去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量小于1000Da的滤液，制得粗乳清蛋白肽；

d、纯化：将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%～25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得乳清蛋白抗氧化肽；

以上均为质量份数。

作为本发明的进一步优化，其操作步骤如下：

a、预处理：将1份乳清蛋白粉与20～30份水混合，在95℃下保持5min后，降温至45℃～60℃，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0～8.5，制成乳清蛋白溶液；

b、酶解：在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入碱性蛋白酶0.01～0.015份，同时NaOH溶液维持系统的pH为7.0～8.5，在45℃～60℃的条件下搅拌3.0～5.0h后，再加入胰蛋白酶0.01～0.015份，仍维持反应液pH为7.0～8.5，在45℃～60℃的条件下搅拌2.0h～3.0h，然后升温至85℃～100℃，保持10min～15min，制得乳清蛋白酶解液；

 c、分离：去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量小于1000Da的滤液，制得粗乳清蛋白肽；

 d、纯化：将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%～25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得乳清蛋白抗氧化肽；

以上均为质量份数。

作为本发明的进一步改进，所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为大孔吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为15～20BV/h；解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为90%、其控制流量为20～30BV/h；冲洗剂为去离子水、其控制流量为15～25BV/h；吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为2%～4%、其控制流量为3～9BV/h；全程切换时间为300～700s、温度控制在25～60℃、压力控制为0.3～1.0MPa。

作为本发明的进一步改进，所述的乳清蛋白为食品级。

作为本发明的进一步改进，所述的大孔吸附树脂为XAD16N吸附树脂、XAD18吸附树脂或XAD1600N吸附树脂。