[发明专利]一种兽用干扰素诱导剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种干扰素诱导剂，具体涉及一种兽用干扰素诱导剂基及其制备方法。

背景技术

干扰素(Interferon，IFN)，是一种细胞因子，具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。干扰素作为一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。

聚肌胞，又称多聚肌苷酸-胞苷酸，是人工合成的双链RNA聚合物，是干扰素强诱生剂，除具有广谱抗病毒的作用，同时还具有抗菌、抗原虫、抗肿瘤、抗辐射和免疫调节等多种生物学作用。此外，聚肌胞因其独特的化学结构，在体内可被降解掉，不会造成残留，危害人类健康，具有安全、环保的特点。聚肌胞在实验动物上的试验、人医的I期和II期临床上治疗疾病的效果已经被证实。目前聚肌胞在人医临床上广泛应用于疱疹病毒、流感病毒、肝炎病毒等病毒性疾病和某些肿瘤疾病的防治。在兽医临床上主要用于治疗病毒性疾病的研究。

目前的聚肌胞注射液产品中含有卡那霉素作为阳离子稳定剂，而卡那霉素的使用容易造成抗生素的残留等问题。壳聚糖虽然可以作为阳离子稳定剂替换卡那霉素，但壳聚糖是一种氨基多糖，由于分子间的作用力较强，只能溶于某些特殊的酸性溶液，且壳聚糖酸溶液贮存过程中易发生降解，黏度和分子质量会发生较大变化而影响品质稳定，极大限制了壳聚糖的广泛应用。曾有报道利用壳聚糖将聚肌胞包被形成纳米微囊，其依据是运用激光笔检验最终制剂的丁达尔现象，由于壳聚糖溶解在酸性溶液中即形成粘性的胶体，在光照下本身就会出现丁达尔现象，与形成含聚肌胞纳米微囊无必然联系，因此，该法尚不足以证明聚肌胞被壳聚糖包裹，此外，因为聚肌胞在酸性溶液中容易降解，聚肌胞-壳聚糖酸溶液并不适合长期保存。

钙离子对稳定聚肌胞的二级结构也有重要的作用，现有技术在合成过程中直接在反应液中添加氯化钙粉末，由于氯化钙本身比较难溶，直接添加粉末会导致高浓度钙离子容易与反应体系中的磷酸氢根、游离的聚肌苷酸和聚胞苷酸等成分形成沉淀而影响产品品质以及合成浓度。

此外，现有的聚肌胞制备技术还用到焦亚硫酸钠、赋形剂等物质，如公开号为CN101810638A的发明专利申请文件，公开了一种内源干扰素诱导物的注射液和纳米微囊化溶液的制备方法，其中具体公开了：在注射水中加入焦亚磷酸钠、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，然后加热20-60摄氏度，接着加入聚胞苷酸搅拌、溶解，保温10min，然后再加入聚肌苷酸，搅拌、溶解，保温15-30min。焦亚硫酸钠、赋形剂等物质易对机体产生不同程度的刺激，尤其是焦亚硫酸钠毒性大不可吞食，接触到人畜眼睛还会产生严重伤害，也不利于车间人员生产操作。上述现有技术制备的聚肌胞产品在给动物注射或者药浴、拌饵给药时有出现副反应以及污染环境的风险，若用于肉用经济动物还牵涉到食品安全问题，难以推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一种副反应少、刺激性低、安全性高的兽用干扰素诱导剂，同时本发明还提供该兽用干扰素诱导剂的制备方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种兽用干扰素诱导剂，其由如下组分制成：pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液、浓度为10-80g/L的氯化钙水溶液、浓度为0.1-5g/L的壳聚糖盐酸盐水溶液、聚肌苷酸、聚胞苷酸，所述聚肌苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5-10g/L，所述聚胞苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5-10g/L，所述氯化钙水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为2-16：1000，所述壳聚糖盐酸盐水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为984-998：1000；所述氯化钙水溶液和壳聚糖盐酸盐水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为1:1。

本发明中所述pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液由二水合磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠和水混合而成；每1L氯化钠-磷酸盐缓冲液中含有0.262g二水合磷酸二氢钠、1.546g磷酸氢二钠、8.768g氯化钠。

本发明中的兽用干扰素诱导剂，其制备方法包括如下步骤：

a.取聚肌苷酸，然后用1/2体积的所述氯化钠-磷酸盐缓冲液(即配方中的氯化钠-磷酸盐缓冲液总体积的一半)溶解，然后在40-70℃的温度下加热5-10分钟；