[发明专利]基于标记基因的真菌遗传筛选方法有效
| 申请号： | 201510240759.1 | 申请日： | 2015-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN104846090B | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 林春花;黄贵修;郑服丛;缪卫国;刘文波 | 申请（专利权）人： | 海南大学;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N1/14 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫 |
| 地址： | 570228 海南省*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 标记 基因 真菌 遗传 筛选 方法 | ||
1.一种真菌遗传筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
克隆受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因；
构建受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因敲除载体；
获得受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因敲除突变体；
对所述受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因敲除突变体进行耐渗透性和耐盐性测定；
受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因作为筛选标记，进行转化验证；
所述受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因为PBS2基因；
所述受体真菌为橡胶树胶孢炭疽菌。
2.权利要求1的方法，其特征在于，所述克隆受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因的步骤包括：在NCBI数据库中搜索已知真菌HOG1MAPK信号途径PBS2基因，通过PCR在受体菌株中扩增、克隆后测序，获得受体真菌PBS2基因。
3.权利要求1的方法，其特征在于，所述构建受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因敲除载体的步骤采用PCR Split-Marker的方法，利用两轮PCR法构建关键基因敲除载体。
4.权利要求1的方法，其特征在于，受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因敲除突变体通过原生质体转化法获得。
5.权利要求1的方法，其特征在于，所述进行耐渗透性和耐盐性测定的步骤为在含有蔗糖、葡萄糖、山梨醇任一种的培养基上测定突变体的耐渗透性，在含有氯化钠培养基上测定突变体的耐盐性，选择最为敏感的耐渗透性或耐盐性的突变体。
6.权利要求1至5任一项所述的方法制备的受体真菌HOG1MAPK信号途径关键基因敲除突变体。
7.权利要求6的突变体在筛选中的用途。
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