[发明专利]一类丙烷基阳离子肽脂质及其合成方法和应用

权利要求书

1.一类丙烷基阳离子肽脂质，其特征是：其具有通式I结构：

其中：

R₁选自C_1-20烷基，x选自1～6，AA选自赖氨酸(Lys)、鸟氨酸(Orn)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丙氨酸(Ala)或甘氨酸(Gly)。

2.根据权利要求1所述的丙烷基阳离子肽脂质，其特征是：R₁选自C₁₂、C₁₄、C₁₆或C₁₈烷基，x选自2～4。

3.权利要求1所述的丙烷基阳离子肽脂质的合成方法，其特征是：步骤如下：

1)采用正交保护法，用保护试剂保护氨基酸的氨基，制备肽头部中间体：所述氨基酸选自Lys、Orn、Arg、His、Asp、Ala或Gly，所述氨基保护试剂为二碳酸二叔丁酯(Boc₂O)、芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(Fmoc-OSu)或氯甲酸苄酯(CbzCl)，所述保护试剂与氨基酸的摩尔比为1:1～8:1，反应溶剂为乙腈、甲苯、丙酮、四氢呋喃或水，反应时间为1～20h，反应温度为0～100℃。反应后旋蒸掉溶剂，进行重结晶提纯，所述重结晶溶剂为乙酸乙酯/石油醚混合溶剂(v/v＝3:1)；

2)用Fmoc-OSu保护试剂保护3-氨基-1,2-丙二醇的氨基，并与酰化试剂酰化后，与烷基胺反应，制备双取代的丙烷基长碳链中间体化合物：所述酰化试剂为羰基二咪唑，所述酰化试剂与3-氨基-1,2-丙二醇的摩尔比为1:1～3:1，酰化后3-氨基-1,2-丙二醇与烷基胺的摩尔比为1:1～8:1，反应溶剂为30～300mL甲苯、二氯甲烷、DMF或氯仿，反应时间为12～48h，反应温度为25～100℃，反应后在70℃下

旋转蒸发掉溶剂，用DMF、乙醇、乙酸乙酯、水或乙醇/水的混合溶剂进行重结晶；

3)将步骤1)制备的肽头部中间体，与步骤2)制备的双长碳链中间体经过酰胺化进行连接：

a首先将肽头部中间体进行活化，所述的活化试剂为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、N,N'-二环己基碳酰亚胺(DCC)或1-羟基苯并三唑(HOBt)，肽头部中间体与活化试剂摩尔比为1:1～1:8，反应温度为0～60℃，反应时间为0.5～24h；

b在步骤a反应液中加入双长碳链中间体的二氯甲烷、DMF或三氯甲烷溶液，经过酰胺化使中间体的氨基与肽头部中间体的羧基生成酰胺键，肽头部中间体与长碳链中间体两者摩尔比为1:1～8:1反应，反应溶剂为甲苯、DMF、氯仿、丙酮或二氯甲烷，反应时间为12～96h，反应温度为20～100℃，

4)将保护基团脱掉，所述氨基脱保护试剂为10％NaHCO₃(w/v)或三氟乙酸，脱保护试剂与类脂化合物摩尔比为1:1～1:2，脱保护时间1～8h，脱保护温度为0～4℃；产物进行重结晶提纯得到粗产物，所述重结晶溶剂为乙酸乙酯、乙腈、乙醇、水或无水乙醚，

5)重结晶后使用柱层析法进行纯化，粗产物溶解在氯仿中，使用硅胶柱纯化该粗产物，用甲醇/氯仿(3:1体积比)混合试剂进行洗脱，用旋转蒸发法去除溶剂，冻干，即得到含有一个氨基酸头部的阳离子肽脂质化合物，

6)以含有一个氨基酸头部的阳离子肽脂质化合物为原料，合成其他丙烷基阳离子肽脂质：将步骤(1)制备的肽头部中间体与步骤(5)制备的含有一个氨基酸头部的阳离子肽脂质，进行氨基酸活化和酰胺化，得到头部为1～6个氨基酸的阳离子脂质化合物，两者摩尔比为1:8～8:1，具体反应条件与提纯方法与步骤(3)(4)(5)相同。

4.一种由权利要求1所述丙烷基阳离子肽脂质制备的阳离子肽脂质体，其特征是：该阳离子肽脂质体为丙烷基阳离子肽脂质分散在水相中形成的粒径大小为100nm左右的均一稳定的表面带有正电荷的脂质体。