[发明专利]一种高浓度光合细菌的培养基及其培养方法

权利要求书

1.一种高浓度光合细菌的培养基，其特征在于：包括以下组分：

醋酸钠5.0g/L，丙酸钠1.0g/L,酵母膏4.0g/L,氯化钠2.0g/L,磷酸氢二钾0.5g/L,磷酸二氢钾0.5g/L,硫酸镁0.5g/L,碳酸氢钠2.0g/L,硫酸铵1.0g/L,辅助营养液2mL，水998mL，pH7.0~7.5；其中，辅助营养液为：烟酸胺0.005g/L，生物素0.001g/L，泛酸钙0.003g/L，维生素B10.007g/L，维生素B60.007g/L。

2.一种高浓度光合细菌的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、菌种准备：以荚膜红假单胞菌作为培养菌株；

步骤二、发酵培养基制备：按照如权利要求1所述的组分配制培养基；

步骤三、一级种子培养：将荚膜红假单胞菌单菌落接入灭菌过的30mL试管培养基中，橡胶塞密封；在光照培养箱中恒温培养，温度30~35℃，光照强度3000~5000Lx；培养至深棕红色，菌体浓度在10⁹~10¹⁰个/mL，结束培养，制得一级种子液；

步骤四、二级种子培养：以一级种子液作为种子液，按照体积比15%~20%的接种量接入灭菌过的1000mL三角瓶培养液中，橡胶塞密封；在光照强度3000~5000Lx下厌氧培养，每日摇荡3~5次；培养至深棕红色，菌体浓度在10⁹~10¹⁰个/mL，制得二级种子液；

步骤五、三级种子培养：以二级种子液作为种子液，按照体积比15~20%的接种量接入灭菌的10L细口广口瓶培养液中，橡胶塞密封；在光照强度3000~5000Lx下厌氧培养，每日上下翻转摇荡3~5次；培养至深棕红色，菌体浓度在10⁹~10¹⁰个/mL，结束培养，制得三级种子液；

步骤六、四级发酵培养：以三级种子培养液作为种子液，按照体积比15~20%的接种量接入已经通过1%高锰酸钾溶液消毒处理的耐高压、酸碱PE袋中，装液量为200L，袋口采用消毒的尼龙绳扎紧；在光照强度在2000~4000Lx下，采用上下双层光照培养；每6小时取样分析，通过可见光分光光度计测定10倍稀释发酵液在600nm波长下的吸收值-OD600nm值，直至OD_600nm值不再增加时终止发酵培养。

3.如权利要求2所述的一种高浓度光合细菌的培养方法，其特征在于：在所述四级发酵培养过程中的第36小时、60小时分别补加20倍浓缩发酵液；每次补加浓缩发酵液后，上下震荡培养袋1分钟，继续厌氧光照培养；在发酵过程中的每隔12小时调整光照强度，使光照强度逐渐增强，增强幅度为每次10%~20%。