[发明专利]一种肺癌检测试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种以血清中miR-21、miR-205为标志物的肺癌检测试剂盒，用于肺癌的筛查和术后的监测。

背景技术

肺癌是一种全球范围内都很常见的癌症，由于临床表现已经是晚期，故有很高的致死率(Jemaletal,2010；Duffyetal,2007)。约有75％的肺癌患者在确诊时已经是晚期或是癌细胞已经转移，因此肺癌患者的5年生存率不到15％(Aberleetal,2011)。一些用于降低肺癌死亡率的筛查策略也被应用，如相对于胸透来说，重度吸烟者做LDCT筛查可使死亡率降低20％，但是很高的假阳性和高昂的成本使得LDCT不能成为一种好的筛查方法，我们仍然需要寻找别的筛查方法。

近年来，血清/血浆中microRNAs(miRNAs)成为新的研究热点。miRNA在血清/血浆中可以稳定存在，表达量不受各种保存条件、保存时间的影响；血清/血浆miRNA的表达无年龄、性别的差异，且具有肿瘤特异性(Chenetal,2008)。因此，血清/血浆中microRNAs可能成为一种新的理想的非侵入性肿瘤标志物。

作为肺癌有前景肿瘤分子标志物，血清miRNA的检测可对肺癌进行早期筛查诊断和预后辅助诊断，但肺癌有关特异性miRNA表达谱的筛选、检测方法及检测程序的标准化、稳定内参基因的选择都是迫切需要解决的问题。血清中的miRNA含量远低于组织，需要一种非常灵敏且特异的检测方法；又由于miRNA引物序列短，引物设计比较困难，没有针对性的软件可以直接利用，故引物及体系均需筛选及优化过程。目前对miRNA的高通量筛查一般采用芯片技术，成本高、特异性和灵敏度有限，且不能满足零散标本实时检测需求；对少数miRNA的实时检测多采用Taqman探针法，部分已形成商业化试剂盒产品，但成本和售价高昂。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明的目的在于提供miR-21与miR-205联合作为肺癌生物标志物在制备或筛选肺癌诊断试剂中的用途。

本发明的另一目的在于提供一种肺癌诊断试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种诊断肺癌的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的第一方面，提供了miR-21与miR-205联合作为肺癌生物标志物在制备或筛选肺癌诊断试剂中的用途。

较优的，所述miR-21与miR-205联合作为肺癌血清生物标志物。

较优的，所述肺癌诊断试剂用于肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

较优的，所述肺癌为非小细胞肺癌。

将miR-21与miR-205联合作为肺癌生物标志物用于制备肺癌诊断试剂，是指将miR-21与miR-205联合作为基于检测miR-21与miR-205含量的肺癌诊断试剂的标准品或阳性对照，用于样本血清中的miR-21与miR-205的检测。

将miR-21与miR-205联合作为肺癌生物标志物用于筛选肺癌诊断试剂，是指将miR-21与miR-205作为靶标应用于肺癌诊断试剂的筛选。在另一优选例中，基于所述的miR-21与miR-205基因序列，筛选特异性针对miR-21的反转录引物、PCR扩增引物对、探针与特异性针对miR-205的反转录引物、PCR扩增引物对、探针从而作为检测肺癌的试剂，来检测样本血清中的miR-21与miR-205水平。

本发明的第二方面，提供一种肺癌诊断试剂盒，包括特异性针对miR-21的反转录引物、PCR扩增引物对、探针与特异性针对miR-205的反转录引物、PCR扩增引物对、探针。

优选地，所述肺癌诊断试剂盒用于肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌。