[发明专利]一种茶树DNA的提取方法在审
| 申请号： | 201510556916.X | 申请日： | 2015-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN105255857A | 公开（公告）日： | 2016-01-20 |
| 发明（设计）人： | 丁洲;李烨昕;江昌俊;刘学诗 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 沈尚林 |
| 地址： | 230036 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 茶树 dna 提取 方法 | ||
1.一种茶树DNA的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）取茶树嫩叶、成熟叶或茶树嫩根放置于液氮中研磨成粉末状；
（2）将步骤（1）的粉末中取出0.2克放入2mL的离心管后，加入650μL水浴的提取液，所述的提取液由pH8.0；100mmol/L的Tris-盐酸、pH8.0；20mmol/L的EDTA、1.0mol/L的氯化钠、w/v比例为4%的PVP、w/v比例为2%的CTAB/SDS组成，漩涡震荡充分混匀后，再加入15μL的β-巯基乙醇，60℃-70℃，水浴15-25min，每隔5min混匀一次，得到粗样品；
（3）水浴结束后加入10μL，10mg/mL的RNase-A混匀后，40℃水浴5min，得到粗样品；
（4）取出离心管先后加入PH8.0；400μL的Tris平衡酚和400μL氯仿/异戊醇，漩涡震荡充分混匀后10000rpm离心10min，获得上清液；
（5）将步骤（4）的上清液移至一个新的2mL的离心管中，加入3倍上清液体积的-20℃预冷无水乙醇，混匀，此时有DNA析出，倒去上清液，后再用1ml-20℃预冷无水乙醇清洗一次，倒去上清液；
（6）将步骤（5）得到的沉淀物中加入45℃预热的去离子水，再放入45℃水浴锅中溶解，重复步骤（5）的操作一至两次，10000rpm离心1min后，去上清液后再次空转10000rpm离心30s后放在常温真空干燥器中蒸发剩余乙醇，待沉淀微白时取出，加入200μL去离子水后获得DNA，后将提取的DNA放置-20℃冰箱中备用。
2.根据权利要求1所述的茶树DNA的提取方法，其特征在于，步骤（2）中CTAB/SDS体积比为1：6。
3.根据权利要求1所述的茶树DNA的提取方法，其特征在于，步骤（4）中氯仿/异戊醇体积比为24：1。
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