[发明专利]一种提取软骨中硫酸软骨素的工艺

说明书

技术领域

本发明属于生化制药领域，具体涉及一种提取软骨中硫酸软骨素的工艺。

背景技术

硫酸软骨素(chondroitinsulfate,CS)是一种天然酸性粘多糖，主要存在于动物软骨组织中，其分子量一般在10×10³～50×10³，具有抗炎、抗癌、抗HIV、降血脂、抗凝血活性、预防关节炎等重要生物功能。在我国其主要用于治疗神经痛、关节炎、肩关节痛和腹腔手术后疼痛等，预防和治疗链霉素引起的听觉障碍及各种噪声引起的听觉困难、耳鸣症等。在澳大利亚，硫酸软骨素一般作为营养保健品存在，用于防治骨关节炎，在日本其作为非处方药，应用于滴眼剂、关节止痛药，在欧美一些发达国家，CS作为营养保健品长期应用于防治冠心病、心绞痛、心肌梗塞、冠状动脉机能不全、心肌缺血等疾病。另一方面，硫酸软骨素不仅作为药品，还作为重要的添加剂，广泛用于各种高档保健品、食品、饲料、高档化妆品中。随着硫酸软骨素新用途的不断扩大，国际市场对硫酸软骨素的需求也呈现快速增长。

随着硫酸软骨素生物活性的不断被揭示和其应用领域的不断扩展，对其精细化程度的要求将会越来越高。目前，有关硫酸软骨素的提取、纯化和分离技术取得了一定的研究成果，但在硫酸软骨素的生产与研究中，要进一步改进现有的生产工艺以提高产品的产率与纯度，降低生产成本，适应国内外对原料和制剂的新要求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种提取软骨中提取硫酸软骨素的工艺，以解决我国现有的粗品硫酸软骨素生产技术简单，产品收率低，纯度低等问题，本发明的方案是：一种提取软骨中硫酸软骨素的工艺，包括如下步骤：

(1)清洗；

(2)煮料：蒸煮罐中蒸煮，冷却；

(3)酶解；

(4)压滤：升温灭酶，过滤得滤液和滤渣；

(5)离心分离：步骤(4)中滤液经离心分离，获得分离液和残渣及油脂；

(6)回流：步骤(5)中的油脂经泵到油脂分离罐中，油脂经油脂分离罐降温凝固分离，分离的酶解液回流进步骤(2)中的蒸煮罐。

(7)离子交换：步骤(5)中的分离液经阴离子交换树脂吸附，得到穿透液；

(8)洗脱：步骤(7)中离子交换树脂经洗脱剂洗脱，得到洗脱液；

(9)硫酸软骨素的提取：步骤(8)中的洗脱液经氧化脱色、超滤、醇沉、脱水离心、干燥得到硫酸软骨素。

现有技术中，经分离出的油脂多未经处理，本发明不仅将经三相分离的油脂再次分离纯化，即用油脂分离罐进行降温凝固分离，有效地将油脂与其所含酶解液进行二次分离，提高油脂纯度，有利于进一步利用，提高经济价值；另一方面将分离的含有硫酸软骨素及其他物质的酶解液回流进蒸煮罐中，在提高原料的利用率，降低成本的同时，增加了产品的产率，也减少了废物的排放，一举三得。

优选，所述的一种提取软骨中硫酸软骨素的工艺，其特征在于所述步骤(6)中分离温度为6～9℃。此优选方案可有效将酶解液与油脂二次分离。

优选，所述步骤(1)中采用超声清洗，清洗液为0.01～0.06mol/LNaHCO₃溶液。多次实验表明，该优选方案对软骨清洗较为彻底。

优选，所述步骤(3)中采用双酶解工艺，其中2709蛋白酶的加入量与猪胰脏的加入量比为1：10～15，为软骨质量的0.1～0.9％，酶解温度在45℃～55℃、pH8.5～9.0，处理时间为4～8小时。此工艺条件下，硫酸软骨素提取率较高，且蛋白质酶解率较高。

优选，所述步骤(4)中所述升温灭酶步骤后，有pH4.0～4.5下处理0.5～3小时，再调pH至5.0～6.0的步骤。

硫酸软骨素中多含有—S0₃H和—COOH等基团，在酶解过程的碱性环境中与钠、钾等阳离子结合成盐，酸性处理，将钠、钾等阳离子洗脱，使其恢复成—S0₃H和—COOH的形式，这样有利于步骤(6)中的离子交换；硫酸软骨素的水溶液粘度较大，而此时是固、液、油三相混合物，硫酸软骨素溶液易粘附在固相和油相中，导致产品的损失，导致产率下降，且由于粘度大，也会粘附不少固相与油相物质，造成分离上的困难，降低产品纯度。研究表明，pH值越低，硫酸软骨素溶液粘度越低，但pH值不得过低，硫酸软骨素本身在酸性环境下不稳定。本发明pH调节有效解决了硫酸软骨素溶液粘度高，易损失，难分离的特点，有效提高了硫酸软骨素的产率。

优选，步骤(4)中升温灭酶后，还包括pH4.3下处理2小时，再调pH至5.4至酶解液明显分层的处理过程。