[发明专利]一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于纳米功能材料以及生物传感技术领域，提供了一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

甲胎蛋白AFP、癌胚抗原CEA等常见的肿瘤标志物，对于肝癌的诊断都能起到一定的作用。对于肿瘤标记物的检测方法很多，如放射免疫分析法、免疫放射分析法、酶标记免疫分析法、化学免疫发光分析法、时间分辨荧光免疫分析法等，但多数检测方法繁琐，操作复杂，费用昂贵，检出限高，因此，建立一种快速、简便、灵敏的检测方法有重要意义。

与其他检测CEA、AFP的方法相比较，该传感器具有更低的检测线和超高的灵敏度。无标型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低、等优点，在临床检验、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。而构建电化学免疫传感器的关键有两点：其一是采用简单、快速、有效的方法将抗原抗体等生物分子固定在电极表面；其二是开发传感器的信号放大技术。

Au/Ag @Fe₃O₄-GS @Cd²⁺具有良好的导电性能，极大的比表面积，因而具有很多活性位点可以很好的固载抗体，能够加速电子传递，镉离子能够传递电子，促进双氧水的催化，促进产生电化学信号。从而Au/Ag @Fe₃O₄-GS @Cd²⁺能够促进多重的信号放大，对于传感器的构建以及实现高灵敏度以及低检测限具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器的制备方法及应用,实现了对肿瘤标志物的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器，用于检测肝癌肿瘤标志物。

本发明的技术方案，包括以下步骤：

1. 一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为3~5mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2） 将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子Au/Ag @Fe₃O₄-GS @Cd²⁺溶液滴涂于电极表面上，室温下晾干；

（3）将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物抗体溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、质量分数为0.5~2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

(5) 滴加6 µL、0.05pg/mL~ 50 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥,制得一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器。

2. Au/Ag @Fe₃O₄-GS @Cd²⁺溶液的制备步骤：

（1） 磁性石墨烯Fe₃O₄-GS的制备

将0.5~0.7g FeCl₃·6H₂O溶解于10mL的乙二醇中，后将1.4~1.6g的乙酸钠，5mL的乙二胺和0.5g的氧化石墨烯加入上述溶液中，磁力搅拌30min后，将该混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至180~220℃，反应6~10小时；后冷却至室温，用50 mL的超纯水和无水乙醇清洗干净；获得的产物在50℃干燥，制得磁性石墨烯Fe₃O₄-GS；

（2）Au/Ag @Fe₃O₄-GS的制备