[发明专利]番茄溃疡病病原菌的分离方法

说明书

技术领域

本发明属于植物病原菌分离技术领域，尤其是一种番茄溃疡病病原菌的分离方法。

背景技术

溃疡病是细菌性维管束病害，是一种毁灭性病害，自1985年在北京市发现后，已相继在内蒙古、山西、河北、黑龙江、吉林、辽宁等省、自治区发生为害。严重发病的地块番茄减产达25％～75％。为了选育抗病品种、研究防病治病方法、筛选防病治病药剂，需要分离提取番茄溃疡病病原菌为实验材料。

现有技术中，分离提取番茄溃疡病病原菌的常规方法是：将采回的病株用自来水冲洗，除掉表面的浮土及部分杂菌，切取病原组织，用酒精浸泡消毒，再用无菌水冲洗，而后将病原组织置于研钵中，用研磨棒将病原组织挤压出组织液，组织液与无菌水混匀后即为溃疡菌悬浮液，用移液枪取悬浮液于培养基平板上涂板。这种分离方法的缺点是：很多标本不能一次性分离成功，需要经过二次甚至多次分离才可得到目标菌，而且初分离杂菌较多，需要多次纯化才可得到纯净的目标菌。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种番茄溃疡病病原菌的分离方法，该方法操作简单，分离成功率高，不需要进行二次甚至多次分离，菌株易于纯化。

本发明的技术方案如下：一种番茄溃疡病病原菌的分离方法，它包括如下步骤：

(1)将采回的病株用自来水冲洗，除掉表面的浮土及部分杂菌；

(2)用手术刀取病健交界处的茎杆，获得长度1～2cm的病茎；

(3)将病茎进行表面消毒处理；

(4)用灭菌的手术刀剖开病茎，取病健交界处组织直接在培养基平板上划线或涂布。

进一步，步骤(3)所述消毒处理的方法是用浸泡了70％酒精的脱脂棉擦拭病茎表面。

进一步，本发明所使用的培养基平板由如下重量份的原料制成：蔗糖9～11份，酸水解酪素7～9份，酵母浸膏3～5份，K₂HPO₁·3H₂O1～3份，MgSO₄·7H₂O0.2～0.4份，琼脂15～18份，水1000份。

本发明的优点为：

(1)剖开病茎，直接取被溃疡菌感染的组织进行病原菌的分离，操作更直接，更具针对性，分离成功率能达到100％。

(2)分离步骤简单，易操作，分离病原菌所用时间短，降低了杂菌感染的几率。

(3)直接取病健交界处组织进行溃疡菌的分离，剔除了病茎表皮及其他组织携带杂菌的可能性，可以分离到纯净的目标菌株。

(4)本发明方法分离时，溃疡菌未受酒精的影响，因此活力较强，纯化时比常规方法更早形成单菌落。

附图说明

图1实施例1本发明方法接种培养24小时后番茄溃疡病病原菌的菌落图；

图2实施例2常规方法接种培养24小时后番茄溃疡病病原菌的菌落图；

具体实施方式

以下作为实施例对本发明的方法进一步说明，将有助于对本发明的进一步的理解，本发明的保护范围不受这些实施例的限定，其保护范围由权利要求书来决定。

实施例1：采用本发明方法对番茄溃疡病病原菌进行分离。

制备培养基：在1000ml蒸馏水中，加入蔗糖10g、酸水解酪素8g、酵母浸膏4g、K₂HPO₄·3H₂O2g、MgSO₄·7H₂O0.3g和琼脂16g，制备平板培养基。

接种培养：一种番茄溃疡病病原菌的分离方法，它包括如下步骤：

(1)将采回的病株用自来水冲洗，除掉表面的浮土及部分杂菌；

(2)用手术刀取病健交界处的茎杆，获得长度1～2cm的病茎；

(3)用浸泡了70％酒精的脱脂棉擦拭病茎表面进行消毒处理；

(4)用灭菌的手术刀剖开病茎，取病健交界处组织直接在培养基平板上划线或涂布。

如图1所示，采用上述方法培养24h即现黄色针尖大小单菌落。不需要进行二次甚至多次分离，就能分离到纯净的目标菌株，这样既节省了试验成本，又大大提高了效率。

实施例2：采用常规方法对番茄溃疡病病原菌进行分离。

(1)将采回的病株用自来水冲洗，除掉表面的浮土及部分杂菌；

(2)用手术刀取病健交界处的茎杆，获得长度1～2cm的病茎；

(3)用70％的酒精浸泡病茎30s，再用无菌水冲洗3次；