[发明专利]一种单链核酸分子、聚合酶活性测定方法及试剂盒

权利要求书

1.一种单链核酸分子，其特征在于，包括茎环结构区和单链区；

所述茎环结构区位于所述单链核酸分子的3’端，且从5’到3’方向依次包括第一配对区、单链环区和第二配对区；

所述第一配对区和第二配对区互补配对；

所述单链环区为(dM)a，M为A、T、C、G或U，a为正整数；

所述单链区为(dN)b，位于所述单链核酸分子的5’端，N为A、T、C、G或U，b为正整数；

所述单链核酸分子上含有淬灭基团；所述淬灭基团位于第一配对区或第二配对区的3’端；所述b在15-150之间。

2.根据权利要求1所述的单链核酸分子，其特征在于，所述单链区为(dA)b、(dT)b、(dC)b、(dG)b或(U)b。

3.根据权利要求1所述的单链核酸分子，其特征在于，所述第一配对区在5-15bp之间。

4.根据权利要求1所述的单链核酸分子，其特征在于，所述a在3-20之间。

5.一种聚合酶活性测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、制备PCR反应体系，所述反应体系包括待测聚合酶、单链核酸分子、双链DNA染料、dNTP和适宜所述待测聚合酶发挥活性的缓冲液；

B、进行PCR反应，并通过荧光检测装置检测反应过程中的荧光强度；

所述单链核酸分子为权利要求1-4中任一项所述的单链核酸分子。

6.根据权利要求5所述的聚合酶活性测定方法，其特征在于，所述双链DNA染料为EvaGreen、Sybr Green I、SYTO9、BEBO、BOXTO或PicoGreen。

7.根据权利要求5所述的聚合酶活性测定方法，其特征在于，所述待测聚合酶为TaqDNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶、Klenow Fragment(3’-5’exo-)DNA聚合酶、Vent DNA聚合酶、MMLV逆转录酶或phi 29 DNA聚合酶。

8.根据权利要求5所述的聚合酶活性测定方法，其特征在于，所述反应体系还包括所述待测聚合酶的抗体，所述待测聚合酶的抗体能够抑制所述聚合酶的低温聚合酶活性。

9.根据权利要求5所述的聚合酶活性测定方法，其特征在于，还包括以下步骤：

C、根据步骤B的结果获得荧光值对时间的双链核酸分子增长曲线，进而获得待测聚合酶的反应初速度，并以待测聚合酶的反应初速度来表示待测聚合酶活性。

10.根据权利要求9所述的聚合酶活性测定方法，其特征在于，还包括以下步骤:

D、配置一系列浓度的第一核酸分子，加入所述双链DNA染料，进而测定不同第一核酸分子浓度条件下对应的荧光强度，进而获得荧光强度对第一核酸分子浓度的标准曲线；

E、根据荧光强度对第一核酸分子浓度的标准曲线，将步骤C所得待测聚合酶的反应初速度，换算成按单位时间内生成的第一核酸分子的量表示的待测聚合酶活性；

所述步骤D与步骤A、B、C没有先后关系；

所述第一核酸分子是与所述单链核酸分子自我复制完成后形成的产物具有相同序列的单链DNA核酸分子。

11.根据权利要求9所述的聚合酶活性测定方法，其特征在于，还包括以下步骤：

F、利用标准聚合酶替换待测聚合酶重复步骤A至C，得标准聚合酶的反应初速度；

G、根据标准聚合酶和待测聚合酶反应初速度的对比，得待测聚合酶的相对酶活性。

12.根据权利要求10所述的聚合酶活性测定方法，其特征在于，还包括以下步骤：

H、利用标准聚合酶替换待测聚合酶重复步骤A至E，得标准聚合酶的聚合酶活性；

I、根据标准聚合酶和待测聚合酶的聚合酶活性的对比，得待测聚合酶的相对酶活性。