[发明专利]抗HPV L1蛋白的广谱单克隆抗体或其抗原结合片段及它们的用途

说明书

本发明涉及可广谱结合人乳头瘤病毒(HPV)L1蛋白的单克隆抗体及其抗原结合片段，以及编码它们的序列，产生它们的细胞株，和应用它们进行诊断、预防或治疗的方法和用途。

本申请是申请日为2012年6月8日、发明名称为“抗HPV L1蛋白的广谱单克隆抗体或其抗原结合片段及它们的用途”、申请号为201210190399.5的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及分子病毒学和免疫学领域。具体而言，本发明涉及可广谱结合人乳头瘤病毒(HPV)L1蛋白的单克隆抗体及其抗原结合片段，以及编码它们的序列，产生它们的细胞株，和应用它们进行诊断、预防或治疗的方法和用途。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)是一种无包膜病毒,它由病毒衣壳以及包裹在衣壳内的约8kbDNA构成。HPV的病毒衣壳是由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成的直径为50-55nm的正二十面体颗粒。目前已经发现了100多种型别的HPV，其中，根据其与肿瘤发生的关系可以分为两类：低危型HPV――包括HPV6和HPV11，其致癌风险低，主要引起尖锐湿疣；高危型HPV――包括HPV16、18、31、33、35、39、45、52、58、59等，其是导致包括女性宫颈癌在内的多种肿瘤疾病的主要原因(Clifford GM，Smith JS，Plummer M，et a1.Br J Cancer，2003，88(1)：63-73)。现有的研究结果表明，可以通过预防HPV感染来预防宫颈癌等疾病的发生。

HPV的疫苗研究发现，体外表达的HPV L1蛋白能自组装成病毒样颗粒(VLP)，其结构与天然HPV高度相似，保留了天然病毒的绝大多数中和表位，可诱导高滴度的中和抗体。因此，现有的以及正在研发的HPV疫苗多以病毒样颗粒为主要疫苗成分。然而，研究发现，HPV VLP主要诱导针对同型HPV的中和抗体，产生针对同型HPV的保护性免疫，而仅在一些同源性高的型别之间存在交叉保护(Giroglou T,Sapp M,Fligge C,et al.Vaccine.2001；19(13-14):1783-93；Orozco JJ,Carter JJ,Koutsky LA.J Virol[J].2005；79(15):9503-14；Fleury MJ，Touze A，Maurel MC,et al.Protein Sci.2009.18(7):1425-1438)。

在疫苗研究中，单克隆抗体是疫苗抗原质控的重要工具，抗体水平是评价疫苗效果的标准，而且，抗体及其表位(尤其是中和抗体对应的中和表位)以及相应的中和机制也是疫苗研发的重要指针。进一步，在应用研究中，中和抗体，特别是广谱中和抗体，在HPV的诊断，预防和治疗上也将具有特别的优势。然而，现有研究表明，HPV L1蛋白所诱导的抗体大多为型别特异性中和抗体，极少有跨型别的广谱中和抗体的报道。目前，已发现的跨型别的抗体仅有HPV16J4、HPV16I23和HPV33E12这3株交叉中和单抗，它们能对几个型别的HPV具有一定程度的交叉中和作用。但是，这三株单抗的中和滴度较低，比特异性的中和单抗(如：中和抗体V5，参见Wang等，Journal of General irology，78：2209－2215(1997))小100倍以上，这大大限制了这些单抗的应用。

因此，本领域仍然需要更多、更有效的广谱抗体，尤其是广谱中和抗体，以能够对生产的疫苗及疫苗的保护效果进行更好的评价，并应用于HPV的诊断、预防和治疗中。

发明内容

本发明提供了可广谱结合HPV L1蛋白的单克隆抗体及其抗原结合片段，以及编码它们的序列，产生它们的细胞株，和应用它们进行诊断、预防或治疗的方法和用途。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。