[发明专利]一种用于乳腺癌诊断的miRNA标志物、其应用及诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于乳腺癌诊断的miRNA 标志物、其应用及诊断试剂盒。

背景技术

乳腺癌目前是全球范围内最常见、致死人数最多的恶性肿瘤之 一，其发病率及死亡率增长迅速。要降低乳腺癌病人的死亡率除了在 病因预防上降低发病率外，提高早期诊断水平和药物治疗的疗效是两 个重要方面。然而，肺癌的早期诊断一直是一个世界性难题，目前影 像诊断(B超、钼靶)，化学诊断(癌反应，血清学和免疫学指标)及组 织细胞学诊断是肿瘤诊断的三大支柱，前者在亚临床期诊断上有很大 局限性，后二者均以肿瘤标志物作为观察指标，可以比影像诊断更早 发现肿瘤的存在，具有高效、高灵敏性、方便、标本易获取及创伤小 等优点，因此，在乳腺癌早期诊治研究中，筛选及鉴定高特异性的乳 腺癌肿瘤标志物一直是研究的重点和难点。

所谓肿瘤标志物，是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞 生物合成、释放或者是肿瘤与宿主相互作用而产生的一类物质，反映 着肿瘤的存在和生长。我们可通过利用化学、免疫、分子生物学等技 术对血液或分泌物进行定性或者定量的检测，通过对其分析，帮助我 们从正常组织中区别肿瘤或者测定肿瘤细胞核、细胞质以及对细胞膜 上的特性进行分析，以此作为辨别肿瘤细胞的标志。乳腺癌的发生与 发展具有十分复杂的机制，其发病的最初阶段涉及到许多乳腺癌相关 基因及其表达的改变，在致癌因素的作用下患者体内可表达多种粘附 分子及其受体或配体，在肿瘤发展的不同时期其释放标志物含量也不 一样。

由于乳腺癌组织病理的多样性、同种病理肿瘤细胞的异质性和肿 瘤生物学行为的复杂性及多态性，造成单一标志物检测对乳腺癌的诊 断价值有限，只能反映了疾病某些侧面的变化，国内外众多学者倾向 于筛选多种有价值的肿瘤标志物进行联合检测，以提高乳腺癌诊断的 阳性率。虽然联合检测优于单项检测已成共识，但并非任意一种组合 均能提高临床诊断的阳性率，在最佳组合上结论颇不一致，甚至出现 相反的结果。因此，寻找一种高灵敏度、高特异性、可实际应用于乳 腺癌临床诊治的生物标志物已成为乳腺癌研究中亟待解决的问题之 一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种用于乳腺癌诊断的 miRNA标志物。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种用于乳 腺癌诊断的miRNA标志物，所述标记物包括miR-146a、miR-155、 miR-21、miR-222和miR-339。

在本发明的第二方面，提供了上述miRNA标志物在制备乳腺癌 诊断试剂盒中的应用。

在本发明的第三方面，提供了一种乳腺癌诊断试剂盒，其能够测 定组织中的miR-146a、miR-155、miR-21、miR-222和miR-339的 含量。

在本发明的一个优选例中，上述试剂盒含有miR-146a,miR-155, miR-21,miR-222和miR-339的引物和探针。

在本发明的一个优选例中，上述引物和探针针对的目标序列如 SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4和SEQID NO.5所示。

在本发明的一个优选例中，上述试剂盒中含有美国应用生物系统 公司的引物探针组合，其产品编号分别为000468、002623、000397、 002276和002184。

在本发明的一个优选例中，上述试剂盒中还含有内参RNU44。

所述诊断试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆 转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等；还可以含有标准品 和/或对照品。

上述人类乳腺癌诊断试剂盒中优选的还包含其它一些辅助试剂， 所述的辅助试剂是定量PCR扩增试剂盒中常规使用的一些试剂，这 些试剂的特性以及它们的配制方法均是本领域技术人员所熟知的；所 述的试剂例如(但不限于)：阴性对照品、阳性对照品；还可以包括荧 光定量PCR反应板、PCR反应板封口膜等。

可使用本领域技术人员所熟知的多种技术(例如定量或半定量 RT-PCR，RNA印迹分析，溶液杂交检测等)测定相关miRNA在乳腺 癌患者和健康人群中的水平；在本发明的具体实施方案中，使用了定 量PCR的方法。