[发明专利]一种药物性耳聋的检测引物组、其构成的反应体系及应用

权利要求书

1.一种药物性耳聋的检测引物组，其特征在于，所述检测引物组如下：

正向外侧引物F3C：SEQIDNO:1；

反向外侧引物B3C：SEQIDNO:2；

正向内侧引物FIPC：SEQIDNO:3；

反向内侧引物BIPC：SEQIDNO:4；

正向外侧引物F3T：SEQIDNO:5；

反向外侧引物B3T：SEQIDNO:6；

正向内侧引物FIPT：SEQIDNO:7；

反向内侧引物BIPT：SEQIDNO:8；

正向外侧引物F3A：SEQIDNO:9；

反向外侧引物B3A：SEQIDNO:10；

正向内侧引物FIPA：SEQIDNO:11；

反向内侧引物BIPA：SEQIDNO:12；

正向外侧引物F3G：SEQIDNO:13；

反向外侧引物B3G：SEQIDNO:14；

正向内侧引物FIPG：SEQIDNO:15；

反向内侧引物BIPG：SEQIDNO:16。

2.根据权利要求1所述的检测引物组，其特征在于，所述SEQIDNO:1-4 所示的序列是用于检测1494位点的C等位基因；

优选地，所述SEQIDNO:5-8所示的序列是用于检测1494位点的T等位基 因；

优选地，所述SEQIDNO:9-12所示的序列是用于检测1555位点的A等位 基因；

优选地，所述SEQIDNO:13-16所示的序列是用于检测1555位点的G等 位基因。

3.一种检测药物性耳聋的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括权利 要求1或2所述的引物组，反应缓冲液，dNTPs，羟基萘酚蓝，甜菜碱，BstDNA 聚合酶，待检样品基因组DNA和去离子水。

4.根据权利要求3所述的反应体系，其特征在于，所述反应缓冲液包括 Tris-HCl，KCl，(NH₄)₂SO₄，MgSO₄和Tween-20；

优选地，所述Tris-HCl的浓度为10-30mM，优选为15-25mM，进一步优 选为20mM；

优选地，所述KCl的浓度为10-60mM，优选为50-55mM，进一步优选为 50mM；

优选地，所述(NH₄)₂SO₄的浓度为5-13mM，优选为8-12mM，进一步优选 为10mM；

优选地，所述MgSO₄的浓度为2-8mM，优选为2-6mM，进一步优选为4 mM；

优选地，所述Tween-20的体积分数为0.1-1％，优选为0.1％。

5.根据权利要求3或4所述的反应体系，其特征在于，所述dNTPs的浓 度为1-2mM，优选为1.2-1.8mM，进一步优选为1.4mM；

优选地，所述羟基萘酚蓝的浓度为108-130μM，优选为115-123μM，进一 步优选为120μM；

优选地，所述甜菜碱的浓度为0.1-1M，优选为0.5-0.8M，进一步优选为 0.8M。

6.根据权利要求3-5中任一项所述的反应体系，其特征在于，所述反应体 系包括反应体系C、反应体系T、反应体系A和反应体系G，其中每个25μL 反应体系含有以下组分：

缓冲液：

7.一种如根据权利要求3-6中任一项所述的反应体系的使用方法，其特征 在于，所述方法包括如下步骤：

将反应体系C、反应体系T、反应体系A和反应体系G所需各组分混合完 毕，放置于恒温水浴锅进行反应，反应后升温进行灭活处理，再根据体系颜色 变化判定结果。