[发明专利]一种药物性耳聋的检测引物组、其构成的反应体系及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种药物性耳聋的检测引物组、 其构成的反应体系及应用。

背景技术

药物中毒性耳聋(简称药物性耳聋)，是指患者因使用或接触某些耳毒性药 物而造成的耳聋，这些药物(包括氨基糖苷类抗菌素、非氨基糖苷类抗菌素、 水杨酸盐等)均对人类听觉神经具有毒副作用，可破坏耳蜗，一般造成双侧、 永久性耳聋，多不可逆。

根据中国2006年第二次全国残疾人抽样调查结果显示，听力残疾患者人数 约2004万人，占全国8296万残疾人总数的24.16％，其中药物致聋的人数多达 800万。其中，氨基糖苷类抗生素的不恰当使用是造成药物性耳聋发生的最常 见因素，这类抗生素包括常见的链霉素、庆大霉素等。另外有研究结果表明， 人类线粒体基因突变的发生与药物性耳聋密切相关。在中国人群中，线粒体基 因的A1555G、C1494T这两个位点突变的发生频率高达4％。A1555G突变和 C1494T突变会在12SrRNA的高度保守的A位形成新的1494C-G1555或 1494U-A1555碱基对。这些改变使得12SrRNA在二级结构上与细菌的 16SrRNA的相应区域的二级结构更加相似，导致糖苷类药物与之发生“不应该” 的结合，引起细胞膜上的Na+，K+-ATP泵功能障碍，造成毛细胞损伤，导致药 物性听力受损甚至耳聋。

目前用于检测这两个位点突变的方法有很多种，如Sanger测序法，这种方 法可以很直观得得到目的位点的突变情况，然而操作复杂，需要两次PCR和大 量的纯化工作，并且费用高昂，耗时较长，不适合大范围推广使用；等位基因 特异性PCR法，这种方法通过设计突变型和野生型特异的PCR引物，通过电 泳比较野生型和突变型PCR产物的大小不同以判定检测样本的突变状况，优点 是费用低廉，然而大规模检测时样本量较大，同时进行大量的电泳操作就会变 得非常繁琐，而且容易造成交叉污染；荧光定量PCR法灵敏度高，不需要人工 检测，因此目前应用比较广泛，然而它依然不能摆脱对昂贵的设备的依赖，同 时，用于检测的探针也是一笔不小的支出。因此，非常有必要开发一种既能快 速准确又能价格低廉的检测方法。

环介导的等温扩增(LAMP)技术是日本科学家于2000年提出的一种等温 扩增技术，其主要特点是针对靶基因的6个区域设计4条特异引物，在链置换 DNA聚合酶(BstDNApolymerase)的作用下进行恒温扩增，仅需15-90分钟 即可产生10⁹-10¹⁰数量级的产物。LAMP反应对模板DNA的质量要求远没有 PCR反应严格，因此DNA的粗提物就可以直接作为检测模板，比起以PCR为 基础的检测方法具有更大的优势，可免去DNA提取的成本和繁琐操作的步骤， 尤其是在大量样本的检测中，这种优势就更加明显。同PCR反应一样，LAMP 的反应也需要引物3端与模板的严格配对，具有敏感性高、特异性好、操作简 便、成本低廉且结果易于判定的优点。

发明内容

本发明为了克服上述方法的缺陷，提供一种药物性耳聋的检测引物组、其 构成的反应体系及应用，所述检测体系具有敏感性高、特异性好和操作简便等 优点。

为达到此发明的目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种药物性耳聋的检测引物组，其特征在于，所述 检测引物组如下：

正向外侧引物F3C：SEQIDNO:1：GGCAAGAAATGGGCTACA；

反向外侧引物B3C：SEQIDNO:2：CGTAGGGGTTTTAGTTAAATGTC；

正向内侧引物FIPC：SEQIDNO:3： TGCTAAATCCACCTTCGACCTCTACCCCAGAAAACTACGAT；

反向内侧引物BIPC：SEQIDNO:4： TAAGAGTAGAGTGCTTAGTTGAACACTTTGAAGTATACTTGAGGATG；

正向外侧引物F3T：SEQIDNO:5：AAACTTAAGGGTCGAAGGTGG；

反向外侧引物B3T：SEQIDNO:6：CTGGTTCGTCCAAGTGCA；