[发明专利]一种高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的制备方法

说明书

本发明涉及一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法。该方法步骤如下：（1）将新鲜白鲢鱼皮清洗去除杂物后，先用碱溶液脱脂，再用酸溶液脱除杂蛋白，漂洗至近中性；（2）将预处理好的白鲢鱼皮加水，调节pH至3.5~4.5，温度至40~45℃，加入胃蛋白酶进行酶解反应，反应时间10~18h，反应过程中维持pH及温度恒定；（3）对上述胃蛋白酶酶解液进行超低温真空浓缩；（4）控制反应条件进行转蛋白反应得到大分子胶原蛋白肽溶液，后处理得。该方法通过控制条件下的转蛋白反应在蛋白质水解的基础上再进行蛋白质的合成获得大分子胶原蛋白肽，分子量分布集中，原辅料利用率高，工艺简单，加工成本低。

技术领域

本发明涉及生物技术中蛋白肽制备领域，具体涉及一种用转蛋白反应制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法。

背景技术

胶原蛋白，是结缔组织中极其重要的一种结构蛋白，是动物体内含量最多、分布最广的蛋白质，约占体内蛋白质总量的25%~30%，而分子量过大的胶原蛋白在人体的吸收利用率低，需经过生物技术降解至分子量到200~10000Da范围的胶原蛋白肽，人体才能有效吸收。研究证明蛋白质水解物的平均分子量是决定其生物学性质最重要的因素之一，蛋白肽组分的理化、功能特性与其分子量大小有关。

通过猪皮、牛皮提取胶原蛋白肽的应用较为广泛，但是鱼皮价格低廉、来源丰富和提取比较容易，且无陆生动物疫病的风险。我国是世界上最大的淡水鱼养殖国，随着淡水鱼类加工业的快速发展，加工过程中产生大量的鱼皮及鱼鳞等废弃物，如不充分利用，污染环境的同时还对资源造成极大的浪费，因此研究从鱼类下脚料中提取胶原蛋白肽具有深远意义。

中国专利申请公布号CN102621213A公开了一种胃蛋白酶法大分子胶原蛋白热变性程度的评价方法，将原料浸泡溶解、加热、酶解后得到分子量在30万Da以上的完整三螺旋结构胶原蛋白，并对胶原蛋白的热变性程度进行评价。中国专利CN102676620 B公开了一种高分子量鱿鱼皮胶原蛋白的制备方法，选用截留分子量为100kda的超滤膜对酶解液进行超滤，得到大分子胶原蛋白肽的同时回收小分子胶原蛋白肽。中国专利申请公开号103627763A公开了一种安康鱼皮胶原蛋白肽分子量的分级方法，安康鱼皮酶解液经过一级板式超滤膜截留分子量在10000道尔顿以上的胶原蛋白肽，然后经过二级卷式超滤膜截留分子量在2000道尔顿以上的胶原蛋白肽，再后经过卷式纳滤膜截留分子量在200道尔顿以上的胶原蛋白肽。以上方法制备的胶原蛋白肽之间分子量大小差距甚远，分布不集中，最终通过超滤分级来得到不同分子量区段的胶原蛋白肽，工艺复杂且成本较高。

发明内容

本发明的发明目的在于针对现有技术存在的不足提供了一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法。该方法通过控制条件下的转蛋白反应在蛋白质水解的基础上再进行蛋白质的合成获得的大分子胶原蛋白肽，分子量分布集中，原辅料利用率高，工艺简单，加工成本低。

本发明的目的是通过如下技术方案得以实现的：

一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其步骤如下：

(1)将新鲜白鲢鱼皮清洗去除杂物后，先用碱溶液脱脂，再用酸溶液脱除杂蛋白，漂洗至近中性（pH 6.5-7.5）；

(2)将预处理好的白鲢鱼皮加水，调节pH至3.5~4.5，温度至40~45℃，加入胃蛋白酶进行酶解反应，反应时间10~18h，反应过程中维持pH及温度恒定；

(3)对上述胃蛋白酶酶解液进行超低温真空浓缩；

(4)控制反应条件进行转蛋白反应得到大分子胶原蛋白肽溶液，后处理得高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽。

进一步地，所述的脱脂为用0.2%~0.4%碱溶液（w:v，g/ml）浸泡6-10h脱脂，冲洗至近中性；所述的脱除杂蛋白为用0.1%~0.3%酸溶液（w:v，g/ml）浸泡3~6h脱除杂蛋白；所述脱脂后先洗涤至近中性再脱除杂蛋白。