[发明专利]一种四鳃鲈鱼专用的微生物饲料及其制作方法

权利要求书

1.一种四鳃鲈鱼专用的微生物饲料的制作方法，其特征在于，包含以下四个步骤：

步骤一、发酵菌株的选育

步骤1，将枯草芽孢菌、植物乳杆菌和啤酒酵母菌分别转接入培养基中进行选育培养，将选育得到的菌株放入冰箱中于2-6℃保存待用；

步骤二、复合菌种的液体高速培养

步骤1，按以下重量比例称取各菌液：地衣芽孢杆菌30-35％、植物乳杆菌14-28％、啤酒酵母菌20-24％、沼泽红假单胞菌20-24％；

步骤2，将所述步骤1中称取得到的植物乳杆菌和啤酒酵母菌菌株接种于液体培养基中，培养得到复合菌液1；

步骤3，将所述步骤1中称取得到的地衣芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌菌株接种于液体培养基中，培养得到复合菌液2；

步骤三、菌种的固体复合发酵

步骤1，将所述步骤二中得到的复合菌液1和复合菌液2接入固体扩大培养基中，进行密封发酵，所述固体扩大培养基中添加0.08-0.1％重量比例的二乙胺四乙酸作为产酶诱导剂；

步骤四、微生物饲料的配制

步骤1，称量氨基酸铁和氨基酸锌，并与所述步骤三中得到的发酵产品混合均匀，得到所述微生物饲料。

2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤一中，将枯草芽孢菌、植物乳杆菌和啤酒酵母菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，于35-40℃温度下培养45-50小时；将沼泽红假单胞菌接入装有马铃薯培养基的茄子瓶中于20℃温度下培养5-9天，待茄子瓶表面菌苔布满，并且白中带黄时即可取出。

3.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤二中，将植物乳杆菌和啤酒酵母菌用无菌生理盐水冲洗，并制成复合菌种，按1：20的重量比例接种于经120-128℃、灭菌时间为30-45分钟灭菌的液体培养基中，并于发酵罐中搅拌25-35分钟，搅拌转速为200-220转/每分钟，搅拌均匀后放入消毒后的塑料桶内静置发酵5-7天，当活菌总数达到40亿/毫升，并且pH值达到3.0-4.5时停止发酵。

4.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤二中的液体培养基中，各组分及其重量百分比为：玉米浆3-5％、糖蜜12-15％、酵母膏0.2-0.4％、硫酸镁0.2-0.5％、硫酸铵0.5-0.7％、磷酸氢二钠0.2-0.5％、无菌水77.8-83.9％。

5.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤二中，将地衣芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌菌苔用无菌生理盐水冲洗，并制成复合菌种液，按1：20-25的重量比例接种于经120-180℃、灭菌30-45分钟的液体培养基中进行发酵，发酵时通气量维持在1：1.0-1.2，发酵时间24-48小时。

6.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤二中的液体培养基中，各组分及其重量百分比为：可溶性淀粉2-5％、豆粕粉0.6-1.2％、玉米浆1-6％、磷酸二氢钾0.2-0.6％、草酸1.4-1.8％、硫酸镁0.4-1％、消泡剂0.5-1％、无菌水86-93％。

7.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤三中，将复合菌液1和复合菌液2按1：20的重量比例混合后，接入经120-128℃、灭菌时间为30-45分钟灭菌的固体扩大培养基中，搅拌30-45分钟至均匀，倒入消毒密封罐中于32-35℃温度下密封发酵8-10天，当水分为35-40％，pH值为4.5-5.5时停止发酵。

8.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤三中的固体扩大培养基中，各组分及其重量百分比为：清糠6-8％、豆粕10-13％、进口鱼粉35-39％、大豆粉8-11％、糖蜜8-10％、玉米粉8-10％、磷酸二氢钾0.5-1％、氯化钾1-1.5％、硫酸镁0.4-0.7％、二乙胺四乙酸0.08-0.1％、无菌水13.7％-22.02％。

9.根据权利要求1所述制作方法，其特征在于，所述步骤四中，按照重量比为1：1称量氨基酸铁和氨基酸锌，再按2-3:100的重量比将所述氨基酸铁、氨基酸锌的混合物与所述步骤三中得到的发酵产品混合。

10.根据权利要求1-9任意一项所述的制作方法制作的四鳃鲈鱼专用的微生物饲料。