[发明专利]支原体TD-PCR检测方法及引物在审
| 申请号： | 201610091494.8 | 申请日： | 2016-02-19 |
| 公开（公告）号： | CN105586421A | 公开（公告）日： | 2016-05-18 |
| 发明（设计）人： | 魏良君;贾明媚;唐苏 | 申请（专利权）人： | 苏州药明康德检测检验有限责任公司;无锡药明康德生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12N15/10;C12R1/35 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 丁纪铁 |
| 地址： | 215104 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 支原体 td pcr 检测 方法 引物 | ||
1.支原体TD-PCR检测方法，其特征在于，步骤包括：
1)抽提待测样品DNA；
2)采用TD-PCR方法检测待测样品DNA中是否含有支原体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)，采用Qiagen试剂盒提取待测样 品DNA。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)，DNA抽提方法为：用500μLPBS 重悬样本，加入50μL蛋白酶K，涡旋混匀，再加入500μLBufferAL裂解液，涡旋混匀， 在56℃下孵育30分钟，加入117μL3M醋酸铅，2234μL纯乙醇，在-20℃～-30℃下沉淀DNA 60min，再在2-8℃下离心60min以上，离心力16000g以上，用500μL75％的乙醇清洗DNA 沉淀，用焦碳酸二乙酯将沉淀的DNA重悬成0.1μg/μLDNA溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)，PCR反应体系包括：DEPC水， 不含MgCl2或dNTPs的10×缓冲液，50mMMgCl2溶液，10mMdNTPs，20μM正向引物，20μM 反向引物，5U/μlTaqDNA聚合酶，共40μl。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)，PCR反应条件为：94℃融链；70-60℃ 退火；72℃延伸。
6.用于权利要求1至5任一项所述方法的引物对，其特征在于，包括正向引物和反向引 物，所述正向引物具有如SEQIDNO.1所示的序列或其互补序列，所述反向引物具有如SEQID NO.2所示的序列或其互补序列。
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