[发明专利]一种1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物的制备方法及检测甲胎蛋白的方法

权利要求书

1.一种1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物的制备方法，其特征在于按照如下的步骤进行

步骤一、将1,1’-二茂铁二甲酸Fc-COOH溶解在甲醇中，在空气中敞口放置生成无限配位聚合物ICP，将无限配位聚合物ICP分散在聚乙烯亚胺PEI溶液中，制得1,1’-二茂铁二甲酸配位聚合物/聚乙烯亚胺复合物Fc-COOH/PEI；

步骤二、将氯铂酸钾K₂PtCl₆溶液加入到沸腾的去离子水中，然后将柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇溶液和含硼氢化钠NaBH₄的柠檬酸钠溶液加入上述溶液进行磁力搅拌，将溶液冷却后，获得的沉淀物用去离子水离心洗涤三次或者以上，即制得Pt纳米颗粒；

步骤三、将步骤二制备的Pt纳米颗粒与步骤一制备的1,1’-二茂铁二甲酸配位聚合物/聚乙烯亚胺复合物Fc-COOH/PEI混合对其进行超声处理2小时，使带有正电的Fc-COOH/PEI复合物和带负电的Pt纳米颗粒通过静电作用生成Fc-COOH/PEI/Pt复合物；

步骤四、将二抗Ab₂和四联体G-quadruplex加入到步骤三制备的Fc-COOH/PEI/Pt复合物中，在4℃的环境下孵育12小时，对生成产物离心，用磷酸缓冲溶液PBS清洗后，加入氯化血红素HeminC₃₄H₃₂ClN₄O₄Fe，生成物用磷酸缓冲液PBS溶液清洗多次后，离心得到的Hemin/G-quadruplex/ Fc-COOH/PEI/Pt Ab₂共轭物即为1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物。

2.根据权利要求1所述的一种1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物的制备方法，其特征在于：步骤一中，1,1’-二茂铁二甲酸Fc-COOH的量为5-8毫克，甲醇的量为5-8毫升，聚乙烯亚胺PEI溶液的量为1-1.8毫升，浓度为0.4克/升，步骤二中，氯铂酸钾K₂PtCl₆的量为3-4.8毫升，质量百分比浓度为0.2%，去离子水的量为39-62毫升，柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇溶液的量为0.92-1.5毫升，质量百分比浓度为1%，硼氢化钠柠檬酸钠溶液的量为0.46-0.74毫升，质量百分比浓度为0.08%，步骤四中，二抗Ab₂和四联体G-quadruplex浓度都为1微摩尔/升，加入量都为250-400微升，氯化血红素HeminC₃₄H₃₂ClN₄O₄Fe的浓度为0.2毫摩尔/升，加入量为500-800微升。

3.利用权利要求1制备的1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物用于非疾病诊断检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：将用Au纳米颗粒进行修饰的玻碳电极放入甲胎蛋白的抗体溶液中，在4℃孵育6-12小时，然后取出玻碳电极放在牛血清蛋白BSA中孵育2-6小时封闭未特异性结合的活性位点，取出玻碳电极后依次用不同浓度的甲胎蛋白抗原修饰玻碳电极，使得抗原与抗体特异性结合，然后将修饰好的玻碳电极在Hemin/G-quadruplex/ Fc-COOH/PEI/Pt Ab₂共轭物中保持25℃下孵育0.5-1小时，然后用PBS溶液清洗2-5次，构建成夹心免疫传感器；将夹心免疫传感器使用差分脉冲伏安法DPV检测甲胎蛋白的浓度。

4.根据权利要求3所述的利用1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物用于非疾病诊断检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：用Au纳米颗粒进行修饰的玻碳电极是指将玻碳电极用Al₂O₃粉末打磨，然后分别在去离子水，丙酮，乙醇中超声清洗，最后通过电沉积法在质量百分比浓度为1%的 HAuCl₄溶液将Au纳米颗粒附着于玻碳电极上。