[发明专利]一种1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物的制备方法及检测甲胎蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学肿瘤标志物检测领域，具体是一种1，1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物制备及其检测甲胎蛋白的方法。

背景技术

对肿瘤标志物的检测方法主要有酶联免疫法（Wan, Y., Qi P., Zhang D.,Wu J.J., Wang Y. 2012. Biosens.Bioelectron. 33, 69–74.和Jia, C.P.,Zhong, X.Q., Hua, B., Liu, M.Y., Jing, F.X., Lou, X.H., Yao, S.H., Xiang, J.Q., Jin, Q.H., Zhao, J.L. 2009. Biosens.Bioelectron. 24, 2836–2841.）、化学发光免疫法（Zhang A.M., Xiang H.K., Zhang X., Guo W.W., Yuan E.H., Huang C.S., Jia N.Q., 2016. Biosens. Bioelectron. 75,206–212.和Xu S.J., Liu Y., Wang T.H., and Li J.H. 2011.Anal. Chem., 83 (10), 3817–3823.）和荧光免疫法（Xie, Q.F., Weng X.H., Lu L.J., Lin Z.Y., Xu X.W., Fu C.L.2015. Biosens. Bioelectron. 77, 46–50. 和Hua, W.H., Liua, Y.S., Yang, H.B., Zhou, X.Q., Li, C.M. 2011. Biosens. Bioelectron.26,3683–3687.）等，虽然这些方法具有灵敏、准确、特异性高等特点, 但其在环保防护、操作速度、定量检测等方面各有不足之处; 尽管有的已实现了自动化，但由于专用仪器、专用试剂价格昂贵，目前尚不能在实验室普及应用。因而发展新的免疫检测技术，降低检测成本，加快检测速度和在线能力以适应大规模筛查已成为亟待解决的问题。为了满足现代生物检测需求，免疫传感器应运而生。它是将高灵敏的传感技术与特异性免疫反应结合起来，监测抗原抗体反应的生物传感器，具有快速、灵敏、选择性高、操作简便等优点，广泛应用于临床检测与诊断。其中，电化学免疫传感器由于其设备小型化，简化分析过程，测量过程自动化等独特优点已经成为检测肿瘤标记物的有力的方法。

近几年，纳米材料的快速发展与应用为传感器的发展提供了广阔的前景。有机无机杂化材料在新型功能材料如选择性催化、分子识别、可逆性主客体分子离子交换、超高纯度分离、生物传导材料、光电材料、磁性材料和芯片等新材料开发中显示了诱人的应用前景,而成为当今化学和材料学科中最为活跃的研究领域之一。例如，Han等人制备了Au-PAMAM-C₆₀杂化材料，用作氧化还原探针，应用在电化学免疫传感器中，实现了对红细胞生成素（EPO）的分析检测。

本文选择制备1，1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物杂化材料，用作标记物来制备电化学免疫传感器，并用于肿瘤标记物（以甲胚蛋白AFP为例）的检测。纳米材料的制备方法简单、快速、成本低，以此为标记物的免疫传感器具有较好的选择性、稳定性和重现性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：如何提供一种甲胎蛋白快速检测的纳米材料，该材料能在常规条件下实现对甲胎蛋白的检测，并具有较低的检测限，且能用于实际血清样品的检测。

本发明所采用的技术方案是：一种1,1’—二茂铁二甲酸/铂纳米颗粒/DNA酶复合物的制备方法，按照如下的步骤进行

步骤一、将1,1’-二茂铁二甲酸Fc-COOH溶解在甲醇中，在空气中敞口放置生成无限配位聚合物ICP，将无限配位聚合物ICP分散在聚乙烯亚胺PEI溶液中，制得1,1’-二茂铁二甲酸配位聚合物/聚乙烯亚胺复合物Fc-COOH/PEI；

步骤二、将氯铂酸钾K₂PtCl₆溶液加入到沸腾的去离子水中，然后将柠檬酸钠Na₃C₆H₅O₇溶液和含硼氢化钠NaBH₄的柠檬酸钠溶液加入上述溶液进行磁力搅拌，将溶液冷却后，获得的沉淀物用去离子水离心洗涤三次或者以上，即制得Pt纳米颗粒；