[发明专利]一种基于CdZnSe三元量子点的光谱型电致化学发光免疫检测方法

权利要求书

1.一种基于CdZnSe量子点的ECL光谱型免疫检测方法，包括步骤如下：

（1）双稳定剂包被的CdZnSe量子点的制备

室温下，将0.20 mol/L CdCl₂溶液加入到100 mL圆底三颈烧瓶中，加超纯水稀释至50 mL；依次向圆底三颈烧瓶中加入 Zn(CH₃COO)₂和 HMP，搅拌5 min后加入MPA；用NaOH将溶液pH调至8.0，缓慢加入Na₂SeO₃溶液，待上述溶液在100℃下加热回流10 min后，加入N₂H₄·H₂O；取回流时间为6h的溶液，4℃避光放置；其中Cd²⁺：Zn：Se：HMP：MPA：N₂H₄·H₂O的摩尔比为1：1：（0.05-0.2）：（0.3-0.7）：（2-3）：400；

（2）Ab₂| CdZnSe NCs的制备

向双稳定剂包被的CdZnSe 量子点溶液中加入含等体积EDC和NHS的PBS缓冲溶液，于室温下反应活化30 min，然后离心得沉淀；将沉淀重新分散到PBS缓冲溶液中，加入Ab₂，室温下震荡摇匀3 h后，加入BSA封闭未反应的活性位点；封闭30 min后，离心得沉淀，将沉淀重新分散到PBS缓冲溶液中，得Ab₂| CdZnSe NCs；

（3）以CdZnSe 量子点为标记物构建光谱型ECL免疫传感器

a、将GCE用0.3 µm的抛光粉抛光至镜面，用超纯水洗去电极表面多余的抛光粉，并用氮气吹干；将玻碳电极置入含ABA的缓冲液中，在0.4-1.2 V电位区间内、以10 mV/s扫速循环伏安扫描两圈，得到GCE∣ABA，用无水乙醇、超纯水依次清洗所得修饰电极；

b、分别取等量 EDC、NHS滴涂于步骤（a）所述修饰电极上，活化电极表面的羧基，37℃反应30 min后冲洗电极表面三次；将Ab₁滴加在GCE∣ABA表面，37℃反应2 h，将Ab₁以共价偶联的方式固定在电极表面，得GCE∣ABA-Ab₁；

c、将GCE∣ABA-Ab₁清洗后，向电极表面滴加BSA 溶液，37℃反应1 h以封闭未反应的活性位点；

d、将步骤（c）得到的电极清洗后，取Ag滴加在电极表面，37℃反应90 min，通过抗原抗体特异性结合实现Ag在电极表面的固定，得GCE∣ABA-Ab₁<Ag；然后将GCE∣ABA-Ab₁<Ag在Ab₂∣CdZnSe NCs溶液中37℃孵育90 min，将量子点固定在电极表面，形成免疫复合物修饰电极，得GCE∣ABA-Ab₁<Ag> Ab₂∣CdZnSeNCs；

（4）光谱型ECL免疫检测

以步骤（3）制得的三元量子点为标记物的光谱型ECL免疫传感器为工作电极，铂电极为对电极、Ag/AgCl电极为参比电极，在含0.01-0.1 mol/L过硫酸铵的PBS缓冲溶液中，对制得的光谱型ECL免疫传感器进行电致化学发光光谱测试。

2.根据权利要求1所述的基于CdZnSe量子点的ECL光谱型免疫检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述的BSA的体积分数为2%。

3.根据权利要求1所述的基于CdZnSe量子点的ECL光谱型免疫检测方法，其特征在于，步骤（2）所述的PBS缓冲溶液为K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述的基于CdZnSe量子点的ECL光谱型免疫检测方法，其特征在于，步骤（3）b中冲洗电极所用冲洗液为PBST溶液，PBST溶液的指标如下：

0.01 mol/L PBS 缓冲液中含 0.02% 吐温 20, pH 7.4。