[发明专利]一种炭角目菌植物内生菌及应用

说明书

本发明公开了一种炭角目菌植物内生菌，该菌株于2016年5月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.12248。本发明还公开了一种炭角目菌植物内生菌在转化三七总皂苷制备越南参皂苷R₁₃、三七皂苷J、西洋参皂苷L₁₆的应用。本发明操作简单、转化特异性强、反应条件温和，微生物次级代谢产物少，提取发酵产物简单；转化率高，可用于皂苷的大量制备，实现皂苷的产业化。

技术领域

本发明属于天然产物提取领域，具体地说，涉及一种炭角目菌植物内生菌及应用。

背景技术

皂苷越南参皂苷R₁₃-、三七皂苷J-)、西洋参皂苷L₁₆-是二/三醇型皂苷，具有广泛的生物活性，对心脑血管、抗肿瘤、神经和免疫系统等方面作用独特且具有潜在的多种活性。因其结构复杂，化学合成尚不可行，需从三七、人参、越南参、绞股蓝等植物中提取获得，但因植物中含量较低，且植物资源有限，为此，利用有限的人参二/三醇型人参皂苷获得大量越南参皂苷R₁₃-、三七皂苷J-、西洋参皂苷L₁₆-方法更为可行简便。目前，常用的生物转化三七总皂苷获得越南参皂苷R₁₃-、三七皂苷J-)、西洋参皂苷L₁₆-的方法多采用微生物发酵或提取微生物粗酶法对皂苷骨架支链结构进行烯基氧化和糖水解，获得皂苷结构的改变。微生物发酵法的菌株来源相对复杂，且筛选具有活性或高活性的菌株相对难度大、筛选成功率低、通常选择几百株菌才可筛选出几株有皂苷转化活性的菌株，一般转化率不是很高且转化过程及转化产物种类(包括发酵微生物的自身次级代谢产物)相对复杂；提取微生物粗酶法，转化特异性高，条件温和，无需微生物发酵所需的培养基，产物目标性明确且不会产生微生物自身的次级代谢产物，但是由于酶的蛋白质属性，且从微生物中提取分离纯化有皂苷转化活性的酶难度大，且纯化后的酶需要溶解在缓冲液中保持酶活力，同时酶回收较困难等一系列问题。所以获得一种高皂苷转化活性，特异性强，次生产物少的菌株发酵和粗酶转化方法对于获得工业化生产皂苷越南参皂苷R₁₃-、三七皂苷J-、西洋参皂苷L₁₆-十分重要。

发明内容

为了提高皂苷越南参皂苷R₁₃-、三七皂苷J-、西洋参皂苷L₁₆-的含量，解决微生物发酵法和粗酶转化三七总皂苷获得三七皂苷转化率低的不足，本发明提出了一种炭角目菌植物内生菌及应用，使用该种炭角目菌植物内生菌，操作简单，转化特异性强，微生物次级代谢产物少，提取发酵产物简单；本发明为工业化生产越南参皂苷R₁₃-、三七皂苷J-、西洋参皂苷L₁₆-提供了一种简便方法，可通过三七总皂苷的生物转化制备获得大量的越南参 皂苷R₁₃-、三七皂苷J-、西洋参皂苷L₁₆-。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种炭角目菌植物内生菌，该菌株于2016年5月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.12248。

本发明还公开了一种上述炭角目菌植物内生菌在转化三七总皂苷制备越南参皂苷R13-、三七皂苷J-、西洋参皂苷L16-的应用。

进一步地，该应用包括以下步骤：

(1)采用常规PDB培养基或马丁氏培养基活化培养炭角目菌植物内生菌；

(2)将步骤(1)活化后菌种接种到无菌PDB培养基进行扩大培养，接种量为质量百分比0.02％～15％，摇床培养2～5d；