[发明专利]用于多重PCR检测致腹泻寄生虫的引物组及试剂盒

权利要求书

1.一种多重PCR检测腹泻寄生虫用引物组，其中，该引物组包括SEQ ID NO.1和3-18所示的引物；所述腹泻寄生虫包括溶组织内阿米巴、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、粪类圆线虫、人芽囊原虫和卫氏并殖吸虫。

2.根据权利要求1所述的引物组，其中，所述引物组还包括SEQ ID NO.19-20所示的引物。

3.用于非诊断目的的腹泻寄生虫的检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)提取待测样本的总DNA；

(2)以所述总DNA为模板，并使用权利要求1或2所述的引物组，进行多重PCR反应，获得多重PCR扩增后的物料；

(3)对所述多重PCR扩增后的物料进行核酸电泳检测，得到核酸电泳检测的结果；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有215bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有溶组织内阿米巴；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有423bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有贾第鞭毛虫；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有256bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有隐孢子虫；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有453bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有日本血吸虫；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有362bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有华支睾吸虫；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有334bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有粪类圆线虫；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有149bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有人芽囊原虫；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有282bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有卫氏并殖吸虫。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其中，SEQ ID NO.3-20所示的引物的最终使用浓度各自为0.1-0.8μM，SEQ ID NO.1所示的引物的最终使用浓度为0.4-0.8μM。

5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其中，多重PCR反应的条件包括如下a-h的步骤：

a：94-96℃，3-6min；

b：94-96℃，15-60s，

c：50-60℃，15-60s，

d：71-73℃，60-120s，进行10-15个b-d的循环；

e：94-96℃，15-60s，

f：55-65℃，15-60s，

g：71-73℃，30-60s，进行30-35个e-g的循环；

h：71-73℃，5-10min。

6.根据权利要求3或4所述的检测方法，其中，所述核酸电泳检测包括核酸凝胶电泳和/或核酸毛细管电泳。

7.一种多重PCR检测腹泻寄生虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组和DNA聚合酶；所述腹泻寄生虫包括溶组织内阿米巴、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、粪类圆线虫、人芽囊原虫和卫氏并殖吸虫。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液和dNTP。

9.权利要求1或2所述的引物组在制备检测腹泻寄生虫的试剂盒中的用途；其中，所述腹泻寄生虫包括溶组织内阿米巴、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、粪类圆线虫、人芽囊原虫和卫氏并殖吸虫。