[发明专利]用于多重PCR检测致腹泻寄生虫的引物组及试剂盒

说明书

本发明提供了多重PCR检测致腹泻寄生虫基因用引物组，其中，该引物组包括SEQ ID NO.1和3‑18所示的引物，本发明还提供了多重PCR检测致腹泻寄生虫基因的检测方法和试剂盒。通过上述技术方案，本发明为致腹泻寄生虫基因的快速、准确筛查提供了完备的技术手段，能实现食物中毒事件发生后的致腹泻寄生虫快速筛检与鉴定，为合理恰当处置病情提供可靠的依据。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及多重PCR检测致腹泻寄生虫的引物组和试剂盒及其检测方法。

背景技术

感染性腹泻是我国传染病中发病率最多、流行面最广、影响严重的一组疾病。目前对寄生虫感染引起腹泻的相关研究相对薄弱。寄生虫引起的腹泻临床上有急性腹泻和慢性腹泻，但绝大多数表现为慢性腹泻，或在急性发作后经常再发。

我国可引起腹泻的寄生虫种类多、分布广、感染高、危害大、各地流行程度不一。目前，在寄生虫病诊断中，病原学检查是寄生虫感染确诊的主要依据。临床诊断仍然主要以方便快捷的粪便病原学检查作为最直接和可靠的确诊依据。

多年来，显微镜检查粪便样本一直被认为是诊断寄生虫的“黄金标准”，其中病原学和免疫学检测方法仍被广泛应用，但是特异性和敏感性不高，不能鉴别虫种和基因型。粪便病原学检测的随机性很大，不能正确反映感染情况。尤其当感染度较低时，粪便检测方法的敏感性较低，不适用于低度流行病区寄生虫感染的检测以及疗效考核，而且，在成虫未产卵以前，即处于潜伏期时，粪便检测法则无法检测到早期感染。

免疫学诊断较病原体检测敏感性高，但由于经药物治疗后病人体内的抗体仍将持续较长时间，所以抗体检测法的疗效考核效果不理想，尤其在疫区反复感染人群中无法区别是现行感染还是既往感染。循环抗原检测相对特异性高，能反映感染虫荷，而且经治疗后，感染的宿主体内循环抗原消失快，可用于确定诊断和(或)疗效考核。但由于成虫外膜具有不断更新的特点，使得血中抗原的量不够稳定，检测结果有时难以反映真实情况，所以循环抗原检测敏感性较低，并受多种因素干扰，尤其对慢性病的检出率较低。

分子生物学技术核酸检测诊断为病原生物的检测提供了快速、高效、灵敏的诊断新方法。聚合酶链反应(PCR)技术以其高敏感性、高特异性等特点，被广泛应用于生命科学的各个领域。现已有应用于多种腹泻寄生虫的核酸检测报道，并显示出较高的敏感性和较强的特异性。在我国，不仅有可以检测单个寄生虫的报道，也有可以同时检测两种或两种以上腹泻寄生虫的试剂盒及检测方法，国外专利中多见使用PCR技术检测单个寄生虫，如日本专利2003-033184(kit and method for cryptosporidium detection)建立了一对引物检测隐孢子虫的试剂盒；美国专利8114976(Cryptosporidium hominis genes and geneproducts for chemotherapeutic，immunoprophylactic and diagnostic applications)建立了多对引物用于检测隐孢子虫的多个基因位点，用于疾病诊断和治疗。现有的分子生物学技术的缺陷在于难以对多种致腹泻寄生虫进行全面筛检，漏检率较高。

因此有必要对现有的致腹泻寄生虫的检测方式进行改进，建立一种快速、特异且敏感地判定致腹泻寄生虫及鉴别致腹泻寄生虫的检测技术。

发明内容

本发明的目的在于解决现有致腹泻寄生虫检测技术中存在的难以全面筛检和漏检率较高的问题，提供一种新的致腹泻寄生虫检测引物和方法。