[发明专利]一种取代度适宜的羧甲基茯苓多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于高分子多糖制备技术领域。具体涉及一种取代度适宜的羧甲基茯苓多糖（CMP）的制备方法，利用该方法制备的CMP可用于制药、保健品、食品、化妆品和饲料等领域。

背景技术

茯苓是一种药食兼用真菌，具有利水渗湿，健脾宁心等的功效，有着良好的药用、食用及保健价值。茯苓含有多种化学成分，主要成分是占茯苓干重90%的茯苓多糖。其中只有1%茯苓多糖可以溶解于水中，现代医学研究表明，水性茯苓多糖具有抗肿瘤、增强免疫的生物活性。其余的碱溶性茯苓多糖则不具有生物活性功能，大部分被当成药渣弃去，造成严重浪费。

通过化学改性的方法，引入合适的离子基团能够显著改善天然多糖的水溶性，改变其在水溶液中的链构象，从而显著提高天然多糖的生物活性。不同的取代基团、取代位置和取代度对多糖衍生物的活性有着重要影响。羧甲基茯苓多糖（CMP）是通过羧甲基化反应，在茯苓多糖分子中引入羧甲基，显著增强了茯苓多糖水溶特性和生物学活性。现代药理学研究表明，CMP具有较强的抗肿瘤活性、调节机体免疫功能，可广泛用于恶性肿瘤放化疗的辅助治疗，显著增强恶性肿瘤患者的免疫功能，能减轻癌症患者放疗、化疗的毒副反应，并使患者的免疫功能得到改善，增强体质。

羧甲基茯苓多糖的制备技术已有许多文献和专利报道，但现有制备技术仍然存在制备时间过长、制备产物活性不稳定以及颜色不理想等一系列问题，无法充分发挥茯苓多糖的资源优势。许多研究者也试图改善现有技术，如在申请号为201410603964.5的专利（一种羧甲基茯苓多糖的制备方法及其新用途）中提到，采用催化剂技术，通过向反应体系中添加用量为茯苓粉10~20%的催化剂，可以显著提高茯苓多糖羧甲基化效率。但该方法不仅降低了制备产物的纯度，而且大大增加了CMP食用安全隐患；在申请号为201210375000.0的专利（一种羧甲基茯苓多糖的制备方法）中提到，通过加入2~5%双氧水溶液脱色2~24小时来改善反应产物的色泽。但该方法不仅增加了制备工序，延长制备时间，同时，使用双氧水对CMP的活性造成损失；多糖衍生物活性高低于引入的离子基团、取代度、取代位置、水溶性和链的构象有关，CMP取代度越高，在水中的溶解度越大。在申请号为200610163425.X专利（高取代度羧甲基茯苓多糖及其制备方法和其应用）中提到，提高CMP的羧甲基取代度（D·S）使其不低于1.0，明显提高CMP的溶解度。在本发明研究中发现，取代度过大或过小都影响CMP的生物活性，而CMP在取代度（D·S）为0.7时，既有良好的水溶性，又有优异和稳定的生物活性。

发明内容

本发明的旨在针对现有制备技术的缺陷，提供一种制备取代度适宜的羧甲基茯苓多糖的方法，以实现提高茯苓多糖羧甲基化效率，缩短反应时间，所获得的反应产物的取代度适宜，水溶解性好，活性稳定，色泽更好等的目的。

本发明提供的技术方案是：

一种取代度适宜的羧甲基茯苓多糖制备新方法，先将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛，得到粒度均匀的茯苓粉；以⁶⁰Co-γ为辐照源，对茯苓粉进行辐照；以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物，加入乙醇溶液进行溶胀；溶胀后，加入氢氧化钠，进行碱化反应，反应结束后，冷却；然后，加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应，得到取代度在0.7左右的羧甲基茯苓多糖。

具有工艺流程如图1所示。

具体步骤是：辐照时，所述⁶⁰Co-γ为辐照源辐照剂量为9kGy~27kGy。

所述乙醇溶液浓度为85%，溶胀料液比为酒精溶液∶茯苓粉=5∶1或6∶1或7∶1。

碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3～0.4倍；加入氢氧化钠之后进行搅拌，碱化反应0.5~1h，反应温度为40～60℃。反应结束后，应进行冷却，冷却至温度10～30℃。

羧甲基化反应中所述氯乙酸的加入量为茯苓粉质量的0.8～1.2倍，使茯苓粉和氯乙酸在过量的氢氧化钠下进行醚化反应3～4h，反应温度为50～70℃，反应完毕后，用冰乙酸调至pH至5.0～6.0，用体积分数80～90%的乙醇洗涤3～5次，除去多余氯离子，并洗至白色或淡黄色，在50℃温度条件下干燥。

本发明所述的取代度适宜的羧甲基茯苓多糖是通过上述生产工艺制备而成的。

本发明所述的取代度适宜的羧甲基茯苓多糖粉经小鼠急性毒性试验证明是安全无毒性的。

此外，针对原有技术工艺缺陷，本发明进行如下改进：