[发明专利]一种分子标签核酸检测方法

权利要求书

1.一种分子标签核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)待测脱氧核糖核酸(DNA)中加入DNA末端补平酶和dNTP，补平DNA末端，并在DNA的3’端增加碱基A；

2)直接往步骤1反应体系中加入DNA连接试剂，使步骤1所得产物与带有多个分子标签的DNA接头连接；

3)使用通用引物进行PCR扩增；

4)将步骤3所得扩增产物和捕获探针进行杂交，得到捕获产物；

5)捕获产物用带有样本识别作用的分子标签引物进行扩增，最终产物用于高通量基因测序；

6)测序后，通过接头两端序列可以获知DNA两端在染色体的起始位置，综合分子标签、DNA片段的起始位置双重校正因素得出测序结果：1.标签序列一致，DNA起始位置一致的为一个来源的DNA；2.标签一致，起始位置不一致的为不同模板DNA；3.标签不一致，起始位置一致为不同模板DNA；4.标签不一致，起始位置不一致为不同模板来源DNA。

2.根据权利要求1所述的分子标签核酸检测方法，其特征在于，步骤1中DNA末端补平酶为T4 DNA聚合酶、Klenowexo-、T4 DNA磷酸激酶(T4 DNA PNK)、Taq聚合酶或Klenow酶中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的分子标签核酸检测方法，其特征在于，步骤1反应条件是37℃20分钟，反应后无需纯化。

4.根据权利要求1所述的分子标签核酸检测方法，其特征在于，步骤2所述DNA连接试剂主要由T4DNA连接酶和DNA接头组成，DNA接头由共同序列、分子标签序列组成，每一个样本加入多个分子标签。

5.根据权利要求4所述的分子标签核酸检测方法，其特征在于，步骤2反应条件是20℃15～20分钟，反应后无需纯化。

6.根据权利要求1所述的分子标签核酸检测方法，其特征在于，步骤3使用和DNA接头通用部分互补的引物，进行PCR扩增。

7.根据权利要求1所述的分子标签核酸检测方法，其特征在于，步骤4扩增产物和需要捕获区域的探针进行杂交，捕获探针为DNA或RNA探针。

8.根据权利要求1所述的分子标签核酸检测方法，其特征在于，步骤5用带有唯一分子标签的引物对样本进行扩增，此标签用来区分具体样本。