[发明专利]一种基于miR-9的肝损伤靶向间充质干细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种肝损伤靶向间充质干细胞及其制备方法与应用，由间充质干细胞转染或感染核酸制备得到，其高表达miR‑9，具体制备为将人间充质干细胞转染miR‑9模拟物（mimic或agomir）或感染表达miR‑9的病毒制备得到；为了进一步提高MSCs靶向肝损伤部位的效率，改善肝功能和组织结构恢复的效果，可以利用碱性成纤维细胞生长因子处理间充质干细胞。本发明的肝损伤靶向间充质干细胞对肝损伤有高效的靶向性，有助于减轻肝纤维化、改善肝功能，稳定性高，便于保存和运输，使用安全，可为肝病患者带来福音。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于miR-9的肝损伤靶向间充质干细胞及其制备方法与应用。

背景技术

肝脏是腹腔内最大的实质性器官，担负人体的重要生理功能，除物质代谢外，还具有内分泌和免疫调节等功能。肝脏所担负的物质代谢功能也决定了它是最易遭受外界因素损伤的器官之一，许多毒害物质的靶器官都是肝脏。肝损伤是各种肝相关疾病的总称。肝损伤可依据不同的标准分类，按病程长短可分为急性肝损伤和慢性肝损伤。急性肝损伤是指短时间内外源性或内源性毒素对肝造成的损害，例如急性病毒感染、短时间内大量的饮酒或服用过量的药物等，对肝功能造成损伤。而慢性肝损伤病程较长，剂量相对较小，表现出一定的蓄积作用，发病机制可能不一样，且多可见组织病理学的改变如肝细胞脂肪变性、空泡变性、凋亡和坏死等，以及微循环障碍和间质纤维增生。长期或反复作用还可能导致肝硬化甚至发展到肝衰竭、终末期肝病。肝病一旦发展到终末期，常规治疗仅能缓解患者的临床症状，且疗效不佳。肝移植被认为是治疗终末期肝病的唯一有效手段，但由于存在问题，限制了肝移植的广泛应用，每年有大量的肝病患者因肝功能衰竭而死亡。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一种来源广泛的成体干细胞，可从骨髓、脂肪、牙髓、脐带以及脐带血等多种组织器官中分离获得，体外易于培养，在一定条件下可分化成多种不同组织类型细胞，包括脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞。因其处于未分化状态，增殖能力活跃，可以在体外大量培养、扩增，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。国内外已有学者将不同来源的MSCs应用于肝病动物模型、临床前及临床肝病的治疗，取得了一些有意义的发现和可喜的治疗效果。研究显示，MSCs在体外可被诱导分化成具有肝细胞的形态、表型和功能特征的细胞，此类细胞能表达白蛋白(albumin)、甲胎蛋白(alpha-fetal protein, AFP)、细胞角蛋白(cytokeratins, CK)CK8、CK18等肝系细胞和胆管细胞的特异性标志物。