[发明专利]一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水及其制备方法

权利要求书

1.一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其特征在于：包括下述重量份的原料，玫瑰纯露：90-100，橄榄液：7-9，薰衣草精油：3-5，泛醇：2-4，低温超氧化物歧化酶：3-5，防腐剂：1-2。

2.根据权利要求1所述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其特征在于：包括下述重量份的原料，玫瑰纯露：95，橄榄液：8，薰衣草精油：4，泛醇：3，低温超氧化物歧化酶：4，防腐剂：1.5。

3.根据权利要求1-2任意一项所述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其特征在于：所述低温超氧化物歧化酶的制备方法为：

(1)粗酶液的制备：无菌操作，将活化好的海黏假交替单胞菌接种到液体发酵培养基中，于20℃，160r/min发酵48h，发酵菌液于4℃，6 000r/min离心30min，得到湿菌体，4℃，6 000r/min离心30min，湿菌体用磷酸缓冲液溶解，于480W超声波冰浴下破碎30min(破碎5s，间隔5s)，破碎后，4℃，12 000r/min离心15min，上清即为粗酶液，上述液体发酵培养基配方百分比为：葡萄糖2.0，酵母膏0.5，陈海水配制，pH自然；

(2)硫酸铵沉淀：制备6份25ml粗酶液，分别向其中加入固体冷硫酸铵，使其饱和溶液浓度分别20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％，4℃盐析16h，pH7.8磷酸缓冲液溶解沉淀蛋白，确定低温超氧化物歧化酶活性最高硫酸铵盐析条件；

(3)超滤浓缩：将盐析完成样品转入经过预处理的截留分子量10KDa超滤管，4℃，6000r/min，超滤30min，去除SO4^2-和部分小分子蛋白，移液枪小心取出浓缩液，4℃，保藏备用，部分溶于磷酸缓冲液，测定低温超氧化物歧化酶酶活力，计算蛋白回收率；

(4)Sephadex G-100柱层析：用pH7.8磷酸缓冲液平衡Sephadex G-100凝胶柱，待基线平衡后，取2ml超滤后酶液加入pH7.8磷酸缓冲液平衡过的Sephadex G-100凝胶柱(Ф1.6cm×60cm)，调节设置自动收集器，每管收集2ml左右，根据显示器上的洗脱峰，确定含低温超氧化物歧化酶各管，收集并测定其酶活力，合并含酶活力各管，4℃，保藏备用；

(5)喷雾干燥：喷雾干燥的参数设置为进口温度110℃、出口温度为60℃、压力位2kgf/cm²、液体流速为5mL/min，喷雾干燥中的保护剂中海藻糖、蔗糖、海藻酸钠的用量为2％-5％，可溶性淀粉的用量为6％-8％，保护剂的总用量控制在10％以内，即得到低温超氧化物歧化酶。

4.根据权利要求1-2任意一项所述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其特征在于：所述防腐剂为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、咪唑烷基脲的一种或几种。

5.根据权利要求1-2任意一项所述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其特征在于：制备方法包括以下步骤：

(1)在一个干净的容器中称量薰衣草精油，加入橄榄液，充分搅拌均匀；

(2)在步骤(1)所述溶液中加入玫瑰纯露、泛醇、低温超氧化物歧化酶、防腐剂，再轻轻搅拌均匀；

(3)将步骤(2)所得溶液在超净台经过滤除菌后，无菌分装，检验合格后包装入库。

6.根据权利要求5所述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其特征在于：步骤(3)中，所述过滤除菌为使用滤菌器进行过滤除菌。