[发明专利]一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种护肤品技术领域，具体涉及一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水及其制备方法。

背景技术

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，EC 1.15.1.1，简称SOD)，是广泛存在生物体内的酸性金属酶，能够催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢，有效地防御自由基对有机体的伤害，是生物体内最佳的自由基清除剂，具有抗炎症、抗病毒、抗辐射、抗衰老等作用，被广泛应用在医药、化妆品、食品等领域。

海洋微生物为了适应极端的海洋环境，具有低温、耐压、嗜盐等特性，其分泌的SOD也进化出许多有价值的酶学特性，如对温度具有更高的抗性，在耐受理化方面也表现出较高的稳定性等。海洋低温酶具有低温下高活力及高催化效率，可大大缩短处理时间并省却昂贵的加热/冷却系统，因而在节能方面有相当大的进步；经过温和的热处理即可使低温酶的活力丧失，而低温或适温处理不会影响产品的品质等特性。鉴于低温SOD在自然和生理温度下的应用优势，海洋低温SOD在医疗保健、食品、化妆品等方面具有广泛的应用前景和开发潜力。

爽肤水也称紧肤水、化妆水等，它的作用就在于再次清洁以恢复肌肤表面的酸碱值，并调理角质层，使肌肤更好地吸收，并为使用保养品做准备。所以洗完脸之后，使用爽肤水可以迅速补充水分。市面上爽肤水的种类很多，不同成分制成的爽肤水其功效不一样。本发明添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水较其他爽肤水抗皱保湿效果更好，绿色天然无危害。

发明内容

本发明的目的是为了弥补现有技术的不足，提供一种抗皱保湿效果更好、性质更温和的保湿爽肤水及其制备方法。

本发明所采用的技术方案为：一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其配方按重量份包括如下组分：

玫瑰纯露：90-100，橄榄液：7-9，薰衣草精油：3-5，泛醇：2-4，低温超氧化物歧化酶：3-5，防腐剂：1-2。

进一步地，所述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，包括下述重量份的原料，玫瑰纯露：95，橄榄液：8，薰衣草精油：4，泛醇：3，低温超氧化物歧化酶：4，防腐剂：1.5。

上述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，所述低温超氧化物歧化酶的制备方法为：

(1)粗酶液的制备：无菌操作，将活化好的海黏假交替单胞菌接种到液体发酵培养基中，于20℃，160r/min发酵48h，发酵菌液于4℃，6 000r/min离心30min，得到湿菌体，4℃，6 000r/min离心30min，湿菌体用磷酸缓冲液溶解。于480W超声波冰浴下破碎30min(破碎5s，间隔5s)，破碎后，4℃，12 000r/min离心15min，上清即为粗酶液，上述液体发酵培养基配方百分比为：葡萄糖2.0，酵母膏0.5，陈海水配制，pH自然；

(2)硫酸铵沉淀：制备6份25ml粗酶液，分别向其中加入固体冷硫酸铵，使其饱和溶液浓度分别20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％，4℃盐析16h，pH7.8磷酸缓冲液溶解沉淀蛋白，确定低温超氧化物歧化酶活性最高硫酸铵盐析条件；

(3)超滤浓缩：将盐析完成样品转入经过预处理的(截留分子量10KDa)超滤管，4℃，6000r/min，超滤30min，去除SO4^2-和部分小分子蛋白，移液枪小心取出浓缩液，4℃，保藏备用。部分溶于磷酸缓冲液，测定低温超氧化物歧化酶酶活力，计算蛋白回收率；

(4)Sephadex G-100柱层析：用pH7.8磷酸缓冲液平衡Sephadex G-100凝胶柱，待基线平衡后，取2ml超滤后酶液加入pH7.8磷酸缓冲液平衡过的Sephadex G-100凝胶柱(Ф1.6cm×60cm)，调节设置自动收集器，每管收集2ml左右，根据显示器上的洗脱峰，确定含低温超氧化物歧化酶各管，收集并测定其酶活力，合并含酶活力各管，4℃，保藏备用；

(5)喷雾干燥：喷雾干燥的参数设置为进口温度110℃、出口温度为60℃、压力位2kgf/cm²、液体流速为5mL/min，喷雾干燥中的保护剂中海藻糖、蔗糖、海藻酸钠的用量为2％-5％，可溶性淀粉的用量为6％-8％，保护剂的总用量控制在10％以内，即得到低温超氧化物歧化酶。

上述的一种添加低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，所述防腐剂为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、咪唑烷基脲的一种或几种。

所述低温超氧化物歧化酶的保湿爽肤水，其制备方法包括以下步骤：