[发明专利]一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法。所述液相色谱中，流动相由甲醇和10mmol/l乙酸铵溶液组成，采用梯度洗脱。所述质谱采用电喷雾正离子源，多反应监测分析模式(MRM)；该方法中槟榔碱在50～2000ng/ml范围内线性关系良好。供试品溶液前处理方法较HPLC法操作简单，操作时间短，检测方法专属性强、灵敏度高、分析时间短，可用于槟榔碱的含量测定、小儿消食片质量控制。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法。

背景技术

小儿消食片收载于《中华人民共和国药典》2015年版一部，本品为浅棕色的片；或为异型薄膜衣片。由炒鸡内金、山楂、六神曲(炒)、炒麦芽、槟榔、陈皮六味中药经过多步工艺制成。功能主治为消食化滞，健脾和胃。用于食滞肠胃所致积滞，症见食少、便秘、脘腹胀满、面黄肌瘦。该药入口酸甜可口，具有易于使小儿接受的优点。临床上用于治疗小儿消化类疾病，是家庭常备药品。槟榔碱在小儿消食片中的药理生理活性主要表现在刺激交感神经，通过细胞外Ca²⁺的内流介导的兴奋M胆碱受体，使胃肠平滑肌张力升高，增强肠蠕动，增加消化液分泌，使食欲增加，起到消食的作用。但是过量的槟榔碱可引起毒性。目前槟榔碱含量的测定方法主要有酸碱滴定法、薄层扫描法、毛细管电泳法、高效液相色谱(HPLC)法等。由于小儿消食片成分复杂，酸碱滴定法只能测定总生物碱的含量；薄层扫描法、毛细管电泳法操作繁复、准确度低；HPLC法准确度高、但样品前处理步骤繁琐，耗时长，方法灵敏度较低。因此这些方法都存在一定的局限性。

发明内容

为了克服现有技术存在的缺陷和不足，本发明提供了一种重现性好、灵敏度高、分析速度快、样品前处理简单的检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法，此法可用于槟榔碱的含量测定、小儿消食片质量控制，给生产过程和用药安全提供有益的参考。

一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法，包括步骤(1)样品制备，(2)标准曲线制备，(3)采用液相色谱-质谱联用检测槟榔碱含量。

所述(1)样品制备的步骤包括：取本品若干片，研细后取约0.6g，精密称定，置25ml量瓶中，加0.9％氯化钠注射液定容至刻度，置磁力搅拌器上以850r/min转速，搅拌5min。即得浓度为24mg/ml供试品混悬液。

精密移取供试品混悬液3ml，置EP管中，超声30min后，0.22μm MICRO PES聚醚砜水系膜过滤，精密量取续滤液500μl、甲醇490μl及内标储备液10μl，置EP管中，混匀，作为供试品进样溶液。

所述内标贮备液中内标为地西泮。

所述(2)标准曲线制备的步骤包括：分别精密量取氢溴酸槟榔碱对照品贮备液5，20，50，100，200μl，内标贮备液10μl，稀释剂适量，到终体积为1000μl，制成标准曲线溶液，采用(3)液相色谱-质谱联用检测的方法检测，记录每个浓度的氢溴酸槟榔碱对应的峰面积；以氢溴酸槟榔碱和内标的峰面积比值为纵坐标，以氢溴酸槟榔碱的浓度为横坐标X，制备氢溴酸槟榔碱的线性回归方程。

所述步骤(3)采用液相色谱-质谱联用检测的步骤包括：

(a)液相色谱条件色谱柱：C18柱；流动相：A：10mmol/l乙酸铵溶液(用甲酸调pH至5.2)；B：甲醇。洗脱方式：梯度洗脱；洗脱梯度程序如下：0～0.5min，15％(v/v)B；2.1～3.0min，90％(v/v)B；3.1～6min，15％(v/v)B。

(b)质谱条件质谱采用Agilent 6430三重四极杆质谱仪，电喷雾正离子源，多反应监测分析模式(MRM)。

所述(a)液相色谱条件中，色谱柱为Agilent Poroshell 120SB-C18色谱柱(4.6mm×75mm，2.7μm)，样品检测时间：6min；流速：1.0ml/min；进样量：5μl；柱温：40℃。