[发明专利]一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法

权利要求书

1.一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）首先将活性污泥与水混合后震荡培养，离心后弃去上清液得混合物；

（b）按比例向混合物中加入含外加碳源无磷培养基，进行厌氧培养；

（c）将步骤（b）所得厌氧培养液离心后弃去上清液，按比例加入无外加碳源含磷培养基，进行缺氧培养；

（d）将步骤（c）所得缺氧培养液离心后弃去上清液，按照步骤（b）和（c）的方法交替进行厌氧培养和缺氧培养多次；

（e）依次采用5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯固体培养基、BTB反硝化固体培养基筛选出目标菌株；

所述含外加碳源无磷培养基成分包括：1-2g/L CH₃COONa，0.1-0.15g/L NH₄Cl，0.18-0.2g/L MgSO₄，0.01-0.015g/L CaCl₂，0.1-0.15g/L NaCl，1-1.5mL/L微量元素溶液，pH值为7.0-8.0，1.0-1.5MPa灭菌10-15min；所述无外加碳源含磷培养基成分包括：0.02-0.04g/LKH₂PO₄，0.15-0.2g/L KNO₃，0.18-0.2g/L MgSO₄，0.01-0.015g/L CaCl₂，0.1-0.15g/L NaCl，1-1.5mL/L微量元素溶液，pH值为7.0-8.0，1.0-1.5MPa灭菌10-15min；所述5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯固体培养基包括5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯低磷固体培养基和5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯高磷固体培养基，其中5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯低磷固体培养基成分包括：1-2g/L CH₃COONa，0.1-0.15g/L NH₄Cl，0.18-0.2g/L MgSO₄，0.01-0.015g/L CaCl₂，0.01-0.02g/L KH₂PO₄，0.1-0.15g/L NaCl，1-1.5mL/L微量元素溶液，15-20g/L琼脂，pH值为7.0-7.5，1.0-1.5MPa灭菌10-15min；5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯高磷固体培养基成分包括：1-2g/L CH₃COONa，0.1-0.15g/L NH₄Cl，0.18-0.2g/L MgSO₄，0.01-0.015g/L CaCl₂，0.1-0.15g/L KH₂PO₄，0.1-0.15g/L NaCl，1-1.5mL/L微量元素溶液，15-20g/L琼脂，pH值为7.0-7.5，1.0-1.5MPa灭菌10-15min；所述微量元素溶液成分包括：5-8g/L EDTA，1-1.5g/LFeCl₃·6H₂O，0.1-0.15g/L H₃BO₃，0.02-0.03g/L CuSO₄·5H₂O，0.18-0.2g/L KI，0.1-0.12g/L MnCl₂·4H₂O，0.05-0.1g/L Na₂MoO₄·2H₂O，0.1-0.12g/L ZnSO₄·7H₂O，0.1-0.15g/L CoCl₂·6H₂O，pH值为7.0-7.5，1.0-1.5MPa灭菌10-15min；制备时待两种5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯固体培养基冷却后，分别在其表面涂布0.1-0.2mL 5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯指示剂；所述BTB反硝化固体培养基成分包括：1-2g/L Na₃C₆H₅O₇·2H₂O，1.0-1.2g/L KNO₃，1-1.5g/L KH₂PO₄，0.2-0.5g/L MgSO₄·7H₂O，0.1-0.2g/L CaCl₂，1-1.5mL/L微量元素，1-1.5mL 1wt%的溴百里酚蓝，15-20g/L琼脂，pH值为6.5-7.0，1.0-1.5MPa灭菌10-15min。