[发明专利]一种用于荧光定量PCR的预装试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于荧光定量PCR的预装试剂，其特征在于：包括以下组分：DNA聚合酶、Buffer、Mg²⁺、dNTPs、SYBR Green Ι染料、ROX校正染料和低温冻干保护剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于荧光定量PCR的预装试剂，其特征在于：上述组分的终浓度如下：DNA聚合酶的浓度为0.05U/ul，10×Buffer、Mg²⁺浓度为4mM，dNTP混合物浓度为0.4mM，2×SYBR Green Ι染料，低温冻干保护剂1.2-7mM。

3.根据权利要求1或2任意所述的一种用于荧光定量PCR的预装试剂，其特征在于：所述低温冻干保护剂包含：海藻糖、蔗糖和牛血清白蛋白。

4.根据权利要求3所述的一种用于荧光定量PCR的预装试剂，其特征在于：所述低温冻干保护剂组分的终浓度如下：海藻糖5-20g/L，蔗糖1-5g/L和牛血清白蛋白1-5g/L。

5.一种用于荧光定量PCR的预装试剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将荧光定量PCR反应体系混合液(DNA聚合酶的浓度为0.05U/ul，10×Buffer，Mg²⁺浓度为4mM，dNTP混合物浓度为0.4mM，2×SYBR Green Ι染料和ROX染料)和低温冻干保护剂按照使用浓度比例混匀；

(2)将混匀后的液体放入冷冻干燥箱中，隔板温度为-45～-55℃，进行预冻3-5h；

(3)进一步升华，保持冷冻干燥2-4h；

(4)重复步骤(3)两次，得到最终的PCR扩增冻干预存试剂；

(5)将PCR扩增冻干预存试剂分装进反应管中，在反应管的1号管中单独加入内参基因的引物序列。

6.根据权利要求5所述的一种用于荧光定量PCR的预装试剂的制备方法，其特征在于：上述步骤1)中PCR反应体系混合液和低温冻干保护剂按照使用浓度比例为3.6-6.2：13-17。

7.根据权利要求5所述的一种用于荧光定量PCR的预装试剂的制备方法，其特征在于：上述步骤5)中的反应管为八连96孔板反应管。

8.根据权利要求7所述的一种用于荧光定量PCR的预装试剂的制备方法，其特征在于：所述八连96孔板反应管的每个反应管使用时总反应体积为20μl。

9.根据权利要求5-8所述的一种用于荧光定量PCR的预装试剂的制备方法，其特征在于：上述步骤5)中的内参基因引物可分为动物来源的和植物来源的，

动物来源的内参基因引物序列如下：

GAPDH F：5’-TGGCACCCAGCACAAATGAA-3’

GAPDH R：5’-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3’

植物来源的内参基因引物序列如下：

18s RNA F：5’-GCGAATGGCTCATTAAATCA-3’

18s RNA R：5’-CTTCCTTGGATGTGGTAGCC-3’。