[发明专利]一种石蜡病理切片组织的水凝胶支撑和脂质清除处理方法

权利要求书

1.一种石蜡病理切片组织的水凝胶支撑和脂质清除处理方法在提高病理切片检测的特异性和敏感性方面的应用，其特征在于包括以下步骤：

S1.将石蜡病理组织切片进行脱蜡，得切片；具体包括以下子步骤：

S1-1.将石蜡病理组织切片置于恒温箱中，于55~65℃保温30~60min；

S1-2.将石蜡病理组织切片置于二甲苯中脱蜡8~15min，反复进行3次；

S1-3.用不同浓度乙醇梯度水化，无水乙醇、无水乙醇、 80%乙醇、 70%乙醇及 60%乙醇各5min，得切片；

S2.将切片进行抗原修复：

S2-1. 将石蜡病理组织切片浸泡在盛有0.01M 枸橼酸钠缓冲溶液的高压锅中，高压加热枸橼酸钠缓冲溶液，压力阀开始冒气后等待5min，停止加热，等缓冲液冷却后，将切片取出；

S2-2 . 把切片用PBS漂洗 5min，所述PBS为磷酸盐缓冲液，pH=7.4；

S3.将步骤S2所得的切片完全浸没于水凝胶中，在0~4℃下浸泡20~40h；

S4.将步骤S3处理后的切片放入第一容器中，交替充入惰性气体/氮气/二氧化碳和抽真空，然后在第一容器充满惰性气体/氮气/二氧化碳的情况下，于37℃保温2.5~6h，直至水凝胶凝固；

S5.将步骤S4处理后的切片放入盛有清除液的第二容器中，置于摇床上，37℃下去除切片组织中的脂质22~30h，最后将切片取出，完成水凝胶支撑和脂质清除处理过程；

所述步骤S3中，水凝胶的制备方法为：质量浓度40%丙烯酰胺、质量浓度2%甲叉双丙烯酰胺、0.1M PBS、ddH₂O按体积比10:2.5:10:77.5混合，且每100mL的混合液体中还加有0.25g的VA-044；

所述步骤S4中，第一容器包括容器本体和Y型气管，所述Y型气管下端口与容器本体相连，两个上端口分别设置有阀门，其中一个上端口与惰性气体/氮气/二氧化碳源相连，另一个上端口与真空泵相连；

交替充入惰性气体/氮气/二氧化碳和抽真空的过程为：先充入惰性气体/氮气/二氧化碳1.5~3min，抽真空15~20min；

所述步骤S5中，清除液的制备方法为：硼酸、SDS和ddH₂O按照重量比0.62:2:50混合，并用10M的NaOH溶液调节PH至8.5。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

还包括S6. 将切片通过免疫组织化学法染色或免疫荧光法染色。